កញ្ចប់ CHO HCP ELISA

វិធីសាស្រ្ត Immunosorbent ELISA មួយជំហានត្រូវបានប្រើក្នុងការវិភាគនេះ។គំរូដែលមាន CHOK1 HCP ប្រតិកម្មក្នុងពេលដំណាលគ្នាជាមួយនឹងអង្គបដិប្រាណប្រឆាំងនឹង CHOK1 ពពែដែលមានស្លាក HRP និងអង្គបដិប្រាណប្រឆាំងនឹង CHOK1 ដែលស្រោបនៅលើចាន ELISA ទីបំផុតបង្កើតបានជាស្មុគ្រស្មាញសាំងវិចនៃអង្គបដិប្រាណដែលមានស្លាកសញ្ញា HCP ដំណាក់កាលរឹង។អង់ទីករ-អង្គបដិប្រាណដែលមិនមានព្រំដែនអាចត្រូវបានយកចេញដោយការលាងចាន ELISA ។ស្រទាប់ខាងក្រោម TMB ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងអណ្តូងសម្រាប់ប្រតិកម្មគ្រប់គ្រាន់។ការអភិវឌ្ឍន៍ពណ៌ត្រូវបានបញ្ឈប់បន្ទាប់ពីបន្ថែមដំណោះស្រាយឈប់ ហើយតម្លៃ OD ឬការស្រូបយកនៃដំណោះស្រាយប្រតិកម្មនៅ 450/650nm ត្រូវបានអានជាមួយឧបករណ៍អានមីក្រូបន្ទះ។តម្លៃ OD ឬតម្លៃស្រូបយកគឺសមាមាត្រទៅនឹងមាតិកា HCP នៅក្នុងដំណោះស្រាយ។ពីនេះកំហាប់ HCP នៅក្នុងដំណោះស្រាយអាចត្រូវបានគណនាតាមខ្សែកោងស្តង់ដារ។

ការដាក់ពាក្យ

ឧបករណ៍នេះត្រូវបានប្រើដើម្បីរកមើលបរិមាណនៃមាតិកានៃសំណល់កោសិកាប្រូតេអ៊ីនម៉ាស៊ីន CHOK1 នៅក្នុងគំរូ។

Cសមាសធាតុ

គ្រឿងបរិក្ខារដែលត្រូវការ

ការផ្ទុកនិងស្ថេរភាព

1.ការដឹកជញ្ជូននៅ -25 ~ -15 ° C ។

2.លក្ខខណ្ឌផ្ទុកមានដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី 1;សមាសធាតុ 1-2 ត្រូវបានរក្សាទុក ≤–20°C,5-6 ត្រូវបានរក្សាទុក RT,3,4,7,8 ត្រូវបានរក្សាទុកនៅ 2-8 ℃;រយៈពេលសុពលភាពគឺ 12 ខែ។

ប៉ារ៉ាម៉ែត្រផលិតផល

1.ភាពរសើប៖ 1ng/ml

២.ជួរនៃការរកឃើញ: 3-100ng / mL

៣.ភាពជាក់លាក់៖ ការវិភាគក្នុងចន្លោះ CV≤ 10%, អន្តរតេស្ត CV≤ 15%

៤.គ្របដណ្តប់ HCP:> 80%

៥.ភាពជាក់លាក់៖ ឧបករណ៍នេះមានលក្ខណៈជាសកល ដោយសារវាមានប្រតិកម្មពិសេសជាមួយ CHOK1 HCP ដោយឯករាជ្យពីដំណើរការបន្សុត។

ការរៀបចំសារធាតុ

១.PBST 0.05%

យក 15 មីលីលីត្រនៃ 20 × PBST 0.05%, ពនឺក្នុង ddH₂O និងបង្កើតបានរហូតដល់ 300 មីលីលីត្រ។

២.1.0% BSA

យក BSA 1g ពីដបហើយពនលាយក្នុង 100 មីលីលីត្រនៃ PBST 0.05% លាយឱ្យល្អរហូតដល់រំលាយទាំងស្រុងហើយទុកនៅ 2-8 ° C ។សតិបណ្ដោះអាសន្ននៃការរំលាយដែលបានរៀបចំមានសុពលភាពរយៈពេល 7 ថ្ងៃ។វាត្រូវបានណែនាំឱ្យរៀបចំតាមតម្រូវការ។

៣.ដំណោះស្រាយរាវរក 2μg/ml

លេបថ្នាំ 48μL នៃ 0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP ហើយពនលាយក្នុង 11,952μL នៃ 1% BSA ដើម្បីទទួលបានកំហាប់ចុងក្រោយនៃដំណោះស្រាយរាវរក 2μg/mL ។

៤.QC និងការរៀបចំស្តង់ដារ CHOK1 HCP

តារាង៖ ការរៀបចំ QC និងស្តង់ដារ 

នីតិវិធីនៃការវិភាគ

១.រៀបចំ​សារធាតុ​ប្រតិកម្ម​ដូច​មាន​បង្ហាញ​ក្នុង "ការ​រៀបចំ​សារធាតុ​ប្រតិកម្ម" ខាងលើ។

២.យក 50μL នៃស្តង់ដារ គំរូ និង QCs (យោងលើតារាងទី 3) ទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ បន្ទាប់មកបន្ថែម 100μL នៃដំណោះស្រាយ Detection (2μg/mL);គ្របចានជាមួយឧបករណ៍ផ្សាភ្ជាប់ ហើយដាក់ចាន ELISA នៅលើម៉ាស៊ីនលាយកំដៅ។ញាស់នៅ 500rpm, 25±3℃ រយៈពេល 2 ម៉ោង។

៣.បង្វែរ microplate នៅក្នុងអាងលិច ហើយបោះចោលដំណោះស្រាយថ្នាំកូត។Pipette 300μL នៃ PBST 0.05% ទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ ដើម្បីលាងចាន ELISA ហើយបោះចោលដំណោះស្រាយ ហើយលាងម្តងទៀត 3 ដង។បង្វែរចាននៅលើកន្សែងក្រដាសស្អាតហើយជូតស្ងួត។

៤.បន្ថែម 100μL នៃស្រទាប់ខាងក្រោម TMB (សូមមើលតារាងទី 1) ទៅអណ្តូងនីមួយៗ បិទចាន ELISA ហើយដាក់ក្នុងទីងងឹតនៅសីតុណ្ហភាព 25±3 ℃ រយៈពេល 15 នាទី។

៥.Pipette 100μL នៃដំណោះស្រាយបញ្ឈប់ទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ។

៦.វាស់ការស្រូបយកនៅរលកប្រវែង 450/650nm ជាមួយឧបករណ៍អានមីក្រូប្លាត។

៧.វិភាគទិន្នន័យដោយ SoftMax ឬកម្មវិធីដែលមានតម្លៃស្មើ។គ្រោងខ្សែកោងស្តង់ដារដោយប្រើគំរូតំរែតំរង់ភស្តុភារបួនប៉ារ៉ាម៉ែត្រ។

ឧទាហរណ៍ខ្សែកោងស្តង់ដារ

ចំណាំ៖ ប្រសិនបើកំហាប់ HCP នៅក្នុងសំណាកគំរូលើសពីដែនកំណត់ខាងលើនៃខ្សែកោងស្តង់ដារ វាចាំបាច់ត្រូវពនលាយឱ្យបានត្រឹមត្រូវជាមួយនឹងសតិបណ្ដោះអាសន្ននៃសារធាតុរំលាយមុនពេលធ្វើតេស្ត។

កំណត់ចំណាំ

ដំណោះស្រាយបញ្ឈប់គឺអាស៊ីតស៊ុលហ្វួរី 2M សូមដោះស្រាយដោយប្រុងប្រយ័ត្ន ដើម្បីជៀសវាងការហៀរទឹក!