Proteinase K (ម្សៅ Lyophilized)
លេខឆ្មា៖ HC4500A
Proteinase K គឺជាប្រូតេអ៊ីន serine ដែលមានស្ថេរភាពជាមួយនឹងភាពជាក់លាក់នៃស្រទាប់ខាងក្រោមធំទូលាយ។វាបំផ្លាញប្រូតេអ៊ីនជាច្រើននៅក្នុងរដ្ឋកំណើតសូម្បីតែនៅក្នុងវត្តមានរបស់ detergents ។ភ័ស្តុតាងពីការសិក្សាអំពីរចនាសម្ព័ន្ធគ្រីស្តាល់ និងម៉ូលេគុលបង្ហាញថា អង់ស៊ីមជាកម្មសិទ្ធិរបស់ក្រុមគ្រួសារ subtilisin ដែលមានទីតាំងសកម្ម catalytic triad (Asp39- របស់គាត់។69- សឺ២២៤)កន្លែងលេចធ្លោនៃការបំបែកគឺចំណង peptide ដែលនៅជាប់នឹងក្រុម carboxyl នៃអាស៊ីតអាមីណូ aliphatic និង aromatic ជាមួយនឹងក្រុមអាល់ហ្វាអាមីណូដែលត្រូវបានទប់ស្កាត់។វាត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅសម្រាប់ភាពទូលំទូលាយរបស់វា។ភាពជាក់លាក់។
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ការផ្ទុករយៈពេលខ្លី 2-8 ℃, -25 ~ -15 ℃ការផ្ទុករយៈពេលវែង។ស្ថានភាពម្សៅស្ងួត -25 ~ -15 ℃ មានសុពលភាព 3 ឆ្នាំ;ម្សៅអង់ស៊ីមគួរតែត្រូវបានរំលាយទៅក្នុងបរិមាណសមស្រប។
ការបញ្ជាក់
| រូបរាង | ម្សៅ lyophilized amorphous ពីពណ៌សទៅពណ៌ស |
| សកម្មភាព | ≥30 U/mg |
| ឌីណាស | រកមិនឃើញទេ។ |
| RNase | រកមិនឃើញទេ។ |
ទ្រព្យសម្បត្តិ
| លេខ EC | 3.4.21.64 (ផ្សំឡើងវិញពីអាល់ប៊ុម Tritirachium) |
| ទម្ងន់ម៉ូលេគុល | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| ចំណុចអ៊ីសូអេឡិចត្រិច | ៧.៨១ |
| pH ល្អបំផុត | 7.0-12.0 Fig.1 |
| សីតុណ្ហភាពល្អបំផុត | 65 ℃ Fig.2 |
| ស្ថេរភាព pH | pH 4.5-12.5 (25℃, 16h) Fig.3 |
| ស្ថេរភាពកំដៅ | ក្រោម 50 ℃ (pH 8.0, 30 នាទី) រូបភាពទី 4 |
| ភ្នាក់ងារធ្វើឱ្យសកម្ម | SDS, អ៊ុយ |
| អ្នករារាំង | Diisopropyl fluorophosphate;ហ្វ្លុយអូរី phenylmethylsulfonyl |
កម្មវិធី
1. ឧបករណ៍ធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យហ្សែន
2. ឧបករណ៍ទាញយក RNA និង DNA
3. ការទាញយកសមាសធាតុដែលមិនមែនជាប្រូតេអ៊ីនចេញពីជាលិកា ការរិចរិលនៃសារធាតុមិនបរិសុទ្ធនៃប្រូតេអ៊ីន ដូចជាវ៉ាក់សាំង DNA និងការរៀបចំ heparin
4. ការរៀបចំក្រូម៉ូសូម DNA ដោយ electrophoresis ជីពចរ
5. blot ខាងលិច
6. Enzymatic glycosylated albumin reagents in vitro diagnosis
ការប្រុងប្រយ័ត្នជាមុន
ពាក់ស្រោមដៃ និងវ៉ែនតាការពារនៅពេលប្រើ ឬថ្លឹង ហើយរក្សាខ្យល់ឱ្យបានល្អបន្ទាប់ពីប្រើរួច។ផលិតផលនេះអាចបណ្តាលឱ្យមានប្រតិកម្មអាលែហ្សីលើស្បែក និងរលាកភ្នែកធ្ងន់ធ្ងរ។ប្រសិនបើស្រូបចូល វាអាចបណ្តាលឱ្យមានអាឡែស៊ី ឬរោគសញ្ញានៃជំងឺហឺត ឬហឺត។អាចបណ្តាលឱ្យរលាកផ្លូវដង្ហើម។
ការវិភាគ
និយមន័យឯកតា
ឯកតាមួយ (U) ត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណអង់ស៊ីមដែលត្រូវការសម្រាប់ hydrolyze casein ដើម្បីបង្កើត 1 μmol tyrosine ក្នុងមួយនាទីក្រោមលក្ខខណ្ឌដូចខាងក្រោម។
ការរៀបចំសារធាតុ
Reagent I: ទឹកដោះគោ 1g casein ត្រូវបានរំលាយក្នុង 50ml នៃសូលុយស្យុង 0.1M sodium phosphate (pH 8.0) incubated in 65-70℃ water for 15mins, stirred and dissolved, cooled by water, adjust by sodium hydroxide to pH 8.0, និងបរិមាណថេរ 100ml ។
Reagent II: 0.1M អាស៊ីត trichloroacetic, 0.2M sodium acetate, 0.3M acetic acid។
Reagent III: 0.4M Na2CO3ដំណោះស្រាយ។
Reagent IV: Forint reagent ពនឺជាមួយទឹកសុទ្ធ 5 ដង។
Reagent V: អង់ស៊ីម diluent: 0.1M សូលុយស្យុង phosphate sodium (pH 8.0)។
Reagent VI: ដំណោះស្រាយ tyrosine: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml tyrosine រំលាយជាមួយ 0.2M HCL ។
នីតិវិធី
1. 0.5ml នៃ reagent I ត្រូវបានកំដៅមុនដល់ 37 ℃ បន្ថែម 0.5ml នៃដំណោះស្រាយ enzyme លាយឱ្យល្អ និង incubate នៅ 37 ℃ សម្រាប់ 10 នាទី។
2. បន្ថែម 1 មីលីលីត្រនៃ reagent II ដើម្បីបញ្ឈប់ប្រតិកម្ម, លាយឱ្យល្អ, និងបន្ត incubation សម្រាប់ 30 នាទី។
3. ដំណោះស្រាយប្រតិកម្ម centrifugate ។
4. យក 0.5ml supernatant បន្ថែម 2.5ml reagent III, 0.5ml reagent IV, លាយអោយសព្វ ហើយ incubate នៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃ រយៈពេល 30 នាទី។
5. OD៦៦០ត្រូវបានកំណត់ជា OD1;ក្រុមត្រួតពិនិត្យទទេ៖ 0.5ml reagent V ត្រូវបានប្រើដើម្បីជំនួសដំណោះស្រាយអង់ស៊ីមដើម្បីកំណត់ OD៦៦០ជា OD2, ΔOD=OD1-អូឌី2.
6. ខ្សែកោងស្តង់ដារ L-tyrosine៖ កំហាប់ខុសគ្នា 0.5mL ដំណោះស្រាយ L tyrosine, 2.5mL Reagent III, 0.5mL Reagent IV ក្នុង 5mL centrifuge tube, incubate in 37℃ for 30mins, detect for OD៦៦០សម្រាប់ការផ្តោតអារម្មណ៍ផ្សេងគ្នានៃ L-tyrosine បន្ទាប់មកទទួលបានខ្សែកោងស្តង់ដារ Y = kX + b ដែល Y គឺជាកំហាប់ L-tyrosine, X គឺជា OD៦០០.
ការគណនា
2: បរិមាណសរុបនៃដំណោះស្រាយប្រតិកម្ម (ml)
0.5: បរិមាណនៃដំណោះស្រាយអង់ស៊ីម (mL)
0.5: បរិមាណរាវប្រតិកម្មដែលប្រើក្នុងការកំណត់ chromogenic (mL)
10: ពេលវេលាប្រតិកម្ម (នាទី)
Df៖ ការរំលាយច្រើន
Cកំហាប់អង់ស៊ីម (mg/mL)
ឯកសារយោង
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett ។(១៩៧២); ២៣:៧៧ ។
2. Wieger U & Hilz H. Biochem ។ជីវវិទ្យា។Res.កុម្មុយនិស្ត។(1971); 44: 513 ។
3. Hilz, H.et al ។អឺរ៉ូ។J. Biochem ។(១៩៧៥); ៥៦:១០៣-១០៨។
4. Sambrook Jet អាល់។ , ការក្លូនម៉ូលេគុល៖ សៀវភៅដៃមន្ទីរពិសោធន៍ ការបោះពុម្ពលើកទី 2 សារព័ត៌មាន Cold Spring Harbor Laboratory Press កំពង់ផែ Cold Spring Harbor (1989)។
រូបភាពទី 2 សីតុណ្ហភាពល្អបំផុត
ប្រតិកម្មក្នុង 20 mM K-phosphate buffer pH 8.0 ។កំហាប់អង់ស៊ីម: 1mg / ml
រូបភាព 3 pH ស្ថេរភាព
25 ℃, 16 ម៉ោង - ការព្យាបាលជាមួយនឹងដំណោះស្រាយសតិបណ្ដោះអាសន្ន 50mM: pH 4.5-5.5, Acetate;pH 6.0-8.0, Na-phosphate;pH 8.0-9.0, Tris-HCLpH 9.0-12.5, Glycine-NaOH ។កំហាប់អង់ស៊ីម: 1mg / ml
រូបភាពទី 4 កំដៅ ស្ថេរភាព
ការព្យាបាលរយៈពេល 30 នាទីជាមួយនឹង 50mM Tris-HCL buffer, pH 8.0 ។កំហាប់អង់ស៊ីម: 1mg / ml
រូបភាពទី 5 ការផ្ទុក ស្ថិរភាពty at ២៥ អង្សាសេ
