PNGase F
Peptide-N-Glycosidase F (PNGase F) គឺជាវិធីសាស្ត្រអង់ស៊ីមដ៏មានប្រសិទ្ធភាពបំផុតសម្រាប់ការយកចេញស្ទើរតែទាំងអស់នៃ oligosaccharides N-linked ពី glycoproteins ។PNGase F គឺជាអាមីដាសដែលបំបែករវាង GlcNAc ខាងក្នុងបំផុត និងសំណល់ asparagine នៃ mannose ខ្ពស់ កូនកាត់ និង oligosaccharides ស្មុគស្មាញពី glycoproteins N-linked ។
ការដាក់ពាក្យ
អង់ស៊ីមនេះមានប្រយោជន៍សម្រាប់ការយកចេញនូវសំណល់កាបូអ៊ីដ្រាតចេញពីប្រូតេអ៊ីន។
ការរៀបចំនិងការបញ្ជាក់
| រូបរាង | រាវគ្មានពណ៌ |
| ភាពបរិសុទ្ធនៃប្រូតេអ៊ីន | ≥95% (ពី SDS-PAGE) |
| សកម្មភាព | ≥500,000 U/ml |
| Exoglycosidase | គ្មានសកម្មភាពអាចត្រូវបានរកឃើញ (ND) |
| ថ្នាំ Endoglycosidase F1 | ND |
| ថ្នាំ Endoglycosidase F2 | ND |
| ថ្នាំ Endoglycosidase F3 | ND |
| ថ្នាំ Endoglycosidase H | ND |
| ប្រូតេអ៊ីន | ND |
ទ្រព្យសម្បត្តិ
| លេខ EC | ៣.៥.១.៥២(ផ្សំពីអតិសុខុមប្រាណ) |
| ទម្ងន់ម៉ូលេគុល | 35 kDa (SDS-PAGE) |
| ចំណុចអ៊ីសូអេឡិចត្រិច | ៨.១៤ |
| pH ល្អបំផុត | 7.0-8.0 |
| សីតុណ្ហភាពល្អបំផុត | 65 អង្សាសេ |
| ភាពជាក់លាក់នៃស្រទាប់ខាងក្រោម | ការបំបែកចំណង glycosidic រវាង GlcNAc និងសំណល់ asparagine រូបភាពទី 1 |
| គេហទំព័រទទួលស្គាល់ | N-linked glycans លុះត្រាតែមាន α1-3 fucose រូបភាព 2 |
| ភ្នាក់ងារធ្វើឱ្យសកម្ម | ឌីធីធី |
| អ្នករារាំង | អេសឌីអេស |
| សីតុណ្ហាភាពផ្ទុក | -25 ~-15 ℃ |
| ភាពអសកម្មនៃកំដៅ | ល្បាយប្រតិកម្ម 20µL ដែលមាន 1µL នៃ PNGase F ត្រូវបានអសកម្មដោយការភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 75°C រយៈពេល 10 នាទី។ |
រូបភាពទី 1 ភាពជាក់លាក់នៃស្រទាប់ខាងក្រោមនៃ PNGase F
រូបភាពទី 2 ការទទួលស្គាល់ទីតាំងរបស់ PNGase F ។
នៅពេលដែលសំណល់ GlcNAc ខាងក្នុងត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹង α1-3 fucose PNGase F មិនអាចបំបែក oligosaccharides N-linked ពី glycoproteins បានទេ។ការកែប្រែនេះគឺជារឿងធម្មតានៅក្នុងរុក្ខជាតិ និងពពួក glycoproteins សត្វល្អិតមួយចំនួន។
Cសមាសធាតុ
|
| សមាសធាតុ | ការប្រមូលផ្តុំ |
| 1 | PNGase F | 50 μl |
| 2 | 10 × Glycoprotein Denaturing Buffer | 1000 μl |
| 3 | 10 × GlycoBuffer ២ | 1000 μl |
| 4 | 10% NP-40 | 1000 μl |
និយមន័យឯកតា
ឯកតាមួយ (U) ត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណអង់ស៊ីមដែលត្រូវការដើម្បីយក> 95% នៃកាបូអ៊ីដ្រាតចេញពី 10 μgនៃ RNase B denatured ក្នុងរយៈពេល 1 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C ក្នុងបរិមាណប្រតិកម្មសរុប 10 μL។
លក្ខខណ្ឌប្រតិកម្ម
1.រំលាយ glycoprotein 1-20 µg ជាមួយទឹក deionized បន្ថែម 1 µl 10 × Glycoprotein Denaturing Buffer និង H2O (បើចាំបាច់) ដើម្បីបង្កើតបរិមាណប្រតិកម្មសរុប 10 µl ។
2.ដាំឱ្យពុះនៅសីតុណ្ហភាព 100 ដឺក្រេរយៈពេល 10 នាទីត្រជាក់វានៅលើទឹកកក។
3.បន្ថែម 2 µl 10 × GlycoBuffer 2, 2 µl 10% NP-40 ហើយលាយ។
4.បន្ថែម 1-2 µl PNGase F និង H2O (បើចាំបាច់) ដើម្បីបង្កើតបរិមាណប្រតិកម្មសរុប 20 µl និងលាយ។
5.ភ្ញាស់ប្រតិកម្មនៅសីតុណ្ហភាព ៣៧ អង្សារសេរយៈពេល ៦០ នាទី។
6.សម្រាប់ការវិភាគ SDS-PAGE ឬការវិភាគ HPLC ។
