Warm Start Bst 2.0 DNA Polymerase (គ្មានគ្លីសេរីន)

Bst DNA polymerase V2 គឺបានមកពី Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I ដែលមានសកម្មភាព 5′→3′ DNA polymerase និងសកម្មភាពជំនួសខ្សែសង្វាក់ខ្លាំង ប៉ុន្តែមិនមានសកម្មភាព 5′→3′ exonuclease ទេ។Bst DNA Polymerase V2 គឺសមស្របតាមឧត្ដមគតិសម្រាប់ការផ្លាស់ទីលំនៅ strand-displacement, isothermal amplification LAMP (loop mediated isothermal amplification) និងការបន្តបន្ទាប់គ្នាយ៉ាងឆាប់រហ័ស។Bst DNA polymerase V2 គឺជាកំណែចាប់ផ្តើមក្តៅដោយផ្អែកលើ Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) ដែលទទួលបានដោយបច្ចេកវិជ្ជាកែប្រែបញ្ច្រាស ដែលអាចរារាំងសកម្មភាព DNA polymerase នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ ដូច្នេះប្រព័ន្ធប្រតិកម្មអាចត្រូវបានដំណើរការ និងបង្កើតនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ដើម្បីការពារការមិន -ការពង្រីកជាក់លាក់ និងបង្កើនប្រសិទ្ធភាពប្រតិកម្ម ហើយកំណែនេះអាចត្រូវបាន lyophilized ។លើសពីនេះទៀតសកម្មភាពរបស់វាត្រូវបានបញ្ចេញនៅសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ដូច្នេះមិនចាំបាច់មានជំហានធ្វើឱ្យសកម្មដាច់ដោយឡែកទេ។

សមាសធាតុ

Bst DNA polymerase V2 (គ្មានគ្លីសេរីន) (8U/μL)

កម្មវិធី

1.ការពង្រីក isothermal ចង្កៀង

2.DNA strand ប្រតិកម្មផ្លាស់ទីលំនៅតែមួយ

3.លំដាប់ហ្សែន GC ខ្ពស់។

4.លំដាប់ DNA នៃកម្រិតណាណូក្រាម។

លក្ខខណ្ឌផ្ទុក

ការដឹកជញ្ជូននៅក្រោម 0 ° C និងត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -25 ° C ~ -15 ° C ។

និយមន័យឯកតា

ឯកតាមួយត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណនៃអង់ស៊ីមដែលបញ្ចូល 25 nmol នៃ dNTP ទៅក្នុងសារធាតុមិនរលាយអាស៊ីតក្នុងរយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 65 អង្សាសេ។

ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព

1.ការវិភាគភាពបរិសុទ្ធនៃប្រូតេអ៊ីន (SDS-PAGE):ភាពបរិសុទ្ធនៃ Bst DNA polymerase V2 គឺ≥99% ត្រូវបានកំណត់ដោយការវិភាគ SDS-PAGE ដោយប្រើការរកឃើញ Coomassie Blue ។

2.Endonucleaseសកម្មភាព:ការភ្ញាស់នៃប្រតិកម្ម 50 μL ដែលមានអប្បបរមា 8 U នៃ Bst DNA polymerase V2 ជាមួយនឹង 1 μg λDNA រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃ នាំឱ្យមិនមានការរិចរិលដែលអាចរកឃើញដូចដែលបានកំណត់នោះទេ។

3.សកម្មភាព Exonuclease:incubation នៃប្រតិកម្ម 50 μL ដែលមានអប្បរមានៃ 8 U នៃ Bst DNA polymerase V2 ជាមួយនឹង 1 μg λ -Hind Ⅲ រំលាយ DNA អស់រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃ លទ្ធផលមិនអាចរកឃើញការរិចរិលដូចដែលបានកំណត់នោះទេ។

4.សកម្មភាព Nickase:ការភ្ញាស់នៃប្រតិកម្ម 50 μL ដែលមានអប្បបរមា 8 U នៃ Bst DNA polymerase V2 ជាមួយនឹង 1 μg pBR322 DNA រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C នាំឱ្យមិនមានការរិចរិលដែលអាចរកឃើញដូចដែលបានកំណត់នោះទេ។

5.សកម្មភាព RNase:ការភ្ញាស់នៃប្រតិកម្ម 50 μL ដែលមានអប្បបរមា 8 U នៃ Bst DNA polymerase V2 ជាមួយនឹង 1.6 μg MS2 RNA រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C នាំឱ្យមិនមានការរិចរិលដែលអាចរកឃើញដូចដែលបានកំណត់នោះទេ។

6.E. coliDNA៖120 U នៃ Bst DNA polymerase V2 ត្រូវបានពិនិត្យរកមើលវត្តមានរបស់ E. coli genomic DNA ដោយប្រើ TaqMan qPCR ជាមួយនឹង primers ជាក់លាក់សម្រាប់ទីតាំង E. coli 16S rRNA ។ការចម្លងរោគ DNA ហ្សែន E. coli គឺ ≤1 ចម្លង។

ប្រតិកម្មចង្កៀង

កំណត់ចំណាំ៖

១) ក.SYTOTM 16 ពណ៌បៃតង (25 ×)៖ យោងតាមតម្រូវការពិសោធន៍ ថ្នាំពណ៌ផ្សេងទៀតអាចត្រូវបានប្រើជំនួស។

2) ខ.ល្បាយបឋម៖ ទទួលបានដោយការលាយ 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB និងបរិមាណផ្សេងទៀត។

ប្រតិកម្មនិងលក្ខខណ្ឌ

1 × HC Bst V2 Buffer សីតុណ្ហភាព incubation ស្ថិតនៅចន្លោះ 60°C និង 65°C។

ភាពអសកម្មនៃកំដៅ

 80 ° C, 20 នាទី។