BspQI
BspQI អាចត្រូវបានបង្ហាញឡើងវិញនៅក្នុង E. coli ដែលអាចស្គាល់ទីតាំងជាក់លាក់ និងត្រូវបានផលិតនៅក្រោម
BspQI ដែលជាការរឹតបន្តឹង endonuclease កម្រិត IIs ត្រូវបានចេញមកពីប្រភេទ E. coli ផ្សំឡើងវិញ ដែលផ្ទុកហ្សែន BspQI ដែលបានក្លូន និងកែប្រែពី Bacillus sphaericus ។វាអាចស្គាល់គេហទំព័រជាក់លាក់ ហើយលំដាប់នៃការទទួលស្គាល់ និងកន្លែងបំបែកមានដូចខាងក្រោម៖
5' · · · · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · · 5'
លក្ខណៈពិសេសផលិតផល
1. សកម្មភាពខ្ពស់ ការរំលាយអាហារលឿន;
2. សកម្មភាពផ្កាយទាប ធានាការកាត់ត្រឹមត្រូវដូចជា "scalpel";
3. ដោយគ្មាន BSA និងសត្វដើមដោយឥតគិតថ្លៃ;
ភាពរសើបនៃមេទីល
Dam methylation:មិនប្រកាន់អក្សរតូចធំ;
Dមេទីលសង់ទីម៉ែត្រ៖មិនប្រកាន់អក្សរតូចធំ;
CpG Methylation៖មិនប្រកាន់អក្សរតូចធំ;
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ផលិតផលគួរតែត្រូវបានដឹកជញ្ជូន ≤ 0 ℃;រក្សាទុកនៅ -25 ~ - 15 ℃លក្ខខណ្ឌ។
សតិបណ្ដោះអាសន្នផ្ទុក
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Recombinant Albumin, 0. 1% Trition X-100 និង 50% glycerol (pH 7.0 @ 25°C)។
និយមន័យឯកតា
ឯកតាមួយត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណអង់ស៊ីមដែលត្រូវការដើម្បីរំលាយ 1µg នៃ DNA គ្រប់គ្រងខាងក្នុងក្នុងរយៈពេល 1 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 50°C ក្នុងបរិមាណប្រតិកម្មសរុប 50 µL។
ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព
ការវិភាគភាពបរិសុទ្ធនៃប្រូតេអ៊ីន (SDS-PAGE)៖ភាពបរិសុទ្ធនៃ BspQI គឺ≥95% កំណត់ដោយការវិភាគ SDS-PAGE ។
RNase៖10U នៃ BspQI ជាមួយ 1.6μg MS2 RNA សម្រាប់រយៈពេល 4 ម៉ោងនៅ 50 ℃ ផ្តល់លទ្ធផលមិនមានការរិចរិលដូចដែលបានកំណត់ដោយ agarose gel electrophoresis ។
សកម្មភាព DNase មិនជាក់លាក់៖10U នៃ BspQI ជាមួយ 1μg λ DNA នៅ 50 ℃ សម្រាប់រយៈពេល 16 ម៉ោង ធៀបនឹង 50 ℃ សម្រាប់រយៈពេល 1 ម៉ោង ផ្តល់ទិន្នផល DNA មិនលើសដូចដែលកំណត់ដោយ agarose gel electrophoresis ។
ការកាត់និងការចងខ្សែ:បន្ទាប់ពីការរំលាយអាហារ 1 μg λDNA ជាមួយ 10U BspQI បំណែក DNA អាចត្រូវបានភ្ជាប់ជាមួយ T4 DNA ligase នៅ 16ºC ។ហើយបំណែកចងទាំងនេះអាចត្រូវបានកាត់ឡើងវិញជាមួយ BspQI ។
E. coli DNA៖ ការរកឃើញ E. coli 16s rDNA-specific TaqMan qPCR បានបង្ហាញថាសំណល់ហ្សែន E.coli ≤ 0.1pg/ul ។
សំណល់ប្រូតេអ៊ីន៖≤ 50 ppm
បាក់តេរី អង់ដូតូស៊ីន៖ LAL-test នេះបើយោងតាមការបោះពុម្ពរបស់ឱសថស្ថានចិន IV 2020 វិធីសាស្ត្រធ្វើតេស្តកម្រិតជែល ច្បាប់ទូទៅ (1143)។មាតិកាអង់ដូតូស៊ីនរបស់បាក់តេរីគួរតែមាន ≤10 EU/mg។
ប្រព័ន្ធប្រតិកម្មនិងលក្ខខណ្ឌ
| សមាសភាគ | កម្រិតសំឡេង |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| ឌីអិនអេ | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μL |
| dd H2O | រហូតដល់ 50 μL |
លក្ខខណ្ឌប្រតិកម្ម: 50 ℃, 1~16 ម៉ោង។
អសកម្មកំដៅ: 80 ° C សម្រាប់ 20 នាទី។
ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម និងលក្ខខណ្ឌដែលបានណែនាំអាចផ្តល់នូវប្រសិទ្ធភាពការរំលាយអាហារអង់ស៊ីមល្អ ដែលសម្រាប់ជាឯកសារយោងតែប៉ុណ្ណោះ សូមយោងទៅលើលទ្ធផលពិសោធន៍សម្រាប់ព័ត៌មានលម្អិត។
កម្មវិធីផលិតផល
ការរឹតបន្តឹងការរំលាយអាហារ endonuclease, ការក្លូនលឿន។
កំណត់ចំណាំ
1. បរិមាណអង់ស៊ីម ≤ 1/10 នៃបរិមាណប្រតិកម្ម។
2. សកម្មភាពផ្កាយអាចកើតឡើងនៅពេលដែលកំហាប់គ្លីសេរីនលើសពី 5% ។
3. សកម្មភាពបំបែកអាចកើតឡើងនៅពេលដែលស្រទាប់ខាងក្រោមក្រោមសមាមាត្រដែលបានណែនាំ។
