ប្រូតេអ៊ីន K NGS (ម្សៅ)
លេខឆ្មា៖ HC4507A
NGS Protease K គឺជាប្រូតេអុីនសេរីនដែលមានស្ថេរភាពជាមួយនឹងសកម្មភាពអង់ស៊ីមខ្ពស់ និងភាពជាក់លាក់នៃស្រទាប់ខាងក្រោមធំទូលាយ។ អង់ស៊ីមនេះនិយមបំបែកចំណង ester និងចំណង peptide ដែលនៅជាប់នឹងស្ថានីយ C នៃអាស៊ីតអាមីណូ hydrophobic អាស៊ីតអាមីណូដែលមានស្ពាន់ធ័រ និងអាស៊ីតអាមីណូក្រអូប។ដូច្នេះវាត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់ដើម្បីបង្ខូចប្រូតេអ៊ីនទៅជា peptides ខ្លី។NGS Protease K គឺជាប្រូតេអុីនសេរីនធម្មតាដែលមានសារធាតុ Asp39- របស់គាត់។69-ស៊ែ២២៤កាតាលីករ triad ដែលមានតែមួយគត់ចំពោះប្រូតេអ៊ីន serine ហើយមជ្ឈមណ្ឌលកាតាលីករត្រូវបានហ៊ុំព័ទ្ធដោយ tow Ca2+កន្លែងចងសម្រាប់ស្ថេរភាព រក្សាសកម្មភាពអង់ស៊ីមខ្ពស់ក្រោមលក្ខខណ្ឌដ៏ធំទូលាយ។
ការបញ្ជាក់
| រូបរាង | ម្សៅ amorphous ពីពណ៌សទៅពណ៌ស lyophilized |
| សកម្មភាពជាក់លាក់ | ≥40U/mg រឹង |
| ឌីណាស | រកមិនឃើញទេ។ |
| RNase | រកមិនឃើញទេ។ |
| Bioburden | ≤50CFU/g រឹង |
| សំណល់អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ែរ | <5pg/mg រឹង |
ទ្រព្យសម្បត្តិ
| ប្រភព | អាល់ប៊ុម Tritirachium |
| លេខ EC | ៣.៤.២១.៦៤(ផ្សំពីអាល់ប៊ុម Tritirachium) |
| ទម្ងន់ម៉ូលេគុល | 29kDa (SDS-PAGE) |
| ចំណុចអ៊ីសូអេឡិចត្រិច | ៧.៨១ រូប ១ |
| pH ល្អបំផុត | 7.0-12.0 (ទាំងអស់អនុវត្តសកម្មភាពខ្ពស់) Fig.2 |
| សីតុណ្ហភាពល្អបំផុត | 65 ℃ រូបភាពទី 3 |
| ស្ថេរភាព pH | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) រូបភាពទី 4 |
| ស្ថេរភាពកំដៅ | ក្រោម 50 ℃ (pH 8.0, 30 នាទី) រូបភាពទី 5 |
| ស្ថេរភាពការផ្ទុក | រក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 25 ℃ រយៈពេល 12 ខែ រូបភាពទី 6 |
| ភ្នាក់ងារធ្វើឱ្យសកម្ម | SDS, អ៊ុយ |
| អ្នករារាំង | Diisopropyl fluorophosphate;benzylsulfonyl fluoride |
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ទុកម្សៅ lyophilized នៅ -25 ~ -15 ℃ ក្នុងរយៈពេលយូរឆ្ងាយពីពន្លឺ;បន្ទាប់ពីការរំលាយ, aliquot ចូលទៅក្នុងបរិមាណសមរម្យសម្រាប់ការផ្ទុករយៈពេលខ្លីនៅ 2-8 ℃ឆ្ងាយពីពន្លឺឬការផ្ទុករយៈពេលវែងនៅ -25 ~ -15 ℃ឆ្ងាយពីពន្លឺ។
ការប្រុងប្រយ័ត្នជាមុន
ពាក់ស្រោមដៃ និងវ៉ែនតាការពារនៅពេលប្រើ ឬថ្លឹង ហើយរក្សាខ្យល់ឱ្យបានល្អបន្ទាប់ពីប្រើរួច។ផលិតផលនេះអាចបណ្តាលឱ្យមានប្រតិកម្មអាលែហ្សីលើស្បែក និងរលាកភ្នែកធ្ងន់ធ្ងរ។ប្រសិនបើស្រូបចូល វាអាចបណ្តាលឱ្យមានអាឡែស៊ី ឬរោគសញ្ញានៃជំងឺហឺត ឬហឺត។អាចបណ្តាលឱ្យរលាកផ្លូវដង្ហើម។
និយមន័យឯកតា
ឯកតាមួយនៃ NGS Protease K ត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណអង់ស៊ីមដែលត្រូវការដើម្បី hydrolyze casein ទៅជា 1 μmol L-tyrosine ក្រោមលក្ខខណ្ឌកំណត់ស្តង់ដារ។
ការរៀបចំសារធាតុ
| សារធាតុប្រតិកម្ម | ក្រុមហ៊ុនផលិត | កាតាឡុក |
| បច្ចេកទេស Caseinពីទឹកដោះគោ | Sigma Aldrich | C7078 |
| ណាអូ | ស៊ីណូហ្វាមគីមីក្រុមហ៊ុន Reagent Co., Ltd. | 10019762 |
| ណា2PO4· 2 ហ2O | ស៊ីណូហ្វាមគីមីក្រុមហ៊ុន Reagent Co., Ltd. | ២០០៤០៧១៨ |
| Na2HPO4 | ស៊ីណូហ្វាមគីមីក្រុមហ៊ុន Reagent Co., Ltd. | ២០០៤០៦១៨ |
| អាស៊ីត Trichloroacetic | ស៊ីណូហ្វាមគីមីក្រុមហ៊ុន Reagent Co., Ltd. | 80132618 |
| សូដ្យូមអាសេតាត | ស៊ីណូហ្វាមគីមីក្រុមហ៊ុន Reagent Co., Ltd. | 10018818 |
| អាស៊ីតអាសេទិច | ស៊ីណូហ្វាមគីមីក្រុមហ៊ុន Reagent Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | ស៊ីណូហ្វាមគីមីក្រុមហ៊ុន Reagent Co., Ltd. | 10011018 |
| សូដ្យូមកាបូណាត | ស៊ីណូហ្វាមគីមីក្រុមហ៊ុន Reagent Co., Ltd. | 10019260 |
| Foline-phenol | Sangon Biotech (សៀងហៃ)ខូអិលធីឌី | A500467-0100 |
| L-tyrosine | ស៊ីហ្គាម៉ា | ៩៣៨២៩ |
Reagent I:
ស្រទាប់ខាងក្រោម៖ 1% Casein ពីសូលុយស្យុងទឹកដោះគោ bovine: រំលាយ 1g bovine milk casein ក្នុង 50ml នៃសូលុយស្យុង 0.1M sodium phosphate pH 8.0 កំដៅក្នុងទឹកងូតទឹកនៅសីតុណ្ហភាព 65-70°C រយៈពេល 15 នាទី កូរអោយរលាយ ត្រជាក់ជាមួយទឹក កែតម្រូវដោយ សូដ្យូមអ៊ីដ្រូសែនទៅ pH 8.0 និងពនលាយក្នុង 100ml ។
Reagent II៖
ដំណោះស្រាយ TCA: អាស៊ីត trichloroacetic 0.1M, 0.2M sodium acetate និង 0.3M acetic acid (ទម្ងន់ 1.64g អាស៊ីត trichloroacetic + 1.64g sodium acetate + 1.724mL acetic acid ជាបន្តបន្ទាប់ បន្ថែមទឹក deionized 50mL កែតម្រូវជាមួយ HCl 4.0, p. 100 មីលីលីត្រ) ។
សារធាតុ III៖
សូលុយស្យុងសូដ្យូមកាបូណាត 0.4m (មានទម្ងន់ 4.24g anhydrous sodium carbonate និងរលាយក្នុងទឹក 100mL)
សារធាតុ IV៖
សារធាតុ Folin phenol: ពនឺ 5 ដងជាមួយទឹក deionized ។
Reagent V:
សារធាតុរំលាយអង់ស៊ីម៖ ដំណោះស្រាយផូស្វ័រសូដ្យូម 0.1 M, pH 8.0 ។
សារធាតុ VI៖
ដំណោះស្រាយស្តង់ដារ L-tyrosine: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine រំលាយជាមួយ 0.2M HCl ។
នីតិវិធី
1. បើកឧបករណ៍វាស់កាំរស្មី UV-Vis ហើយជ្រើសរើសការវាស់ស្ទង់រូបភាព។
2. កំណត់ប្រវែងរលកជា 660nm ។
3. បើកទឹកងូតទឹក កំណត់សីតុណ្ហភាពដល់ 37 ℃ ធានាសីតុណ្ហភាពមិនផ្លាស់ប្តូររយៈពេល 3-5 នាទី។
4. កំដៅស្រទាប់ខាងក្រោម 0.5mL នៅក្នុងបំពង់ centrifuge 2mL នៅអាងទឹក 37℃ រយៈពេល 10 នាទី។
5. ស្រង់សូលុយស្យុងអង់ស៊ីម 0.5mL ចូលក្នុងបំពង់ centrifuge preheated រយៈពេល 10 នាទី។កំណត់អង់ស៊ីម diluent ជាក្រុមទទេ។
6. បន្ថែម 1.0 mL TCA reagent ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីប្រតិកម្ម។លាយឱ្យសព្វហើយដាក់ក្នុងទឹកងូតទឹករយៈពេល ៣០ នាទី។
7. ដំណោះស្រាយប្រតិកម្ម centrifugate ។
8. បន្ថែមសមាសភាគខាងក្រោមនៅក្នុងលំដាប់ដែលបានបញ្ជាក់។
| សារធាតុប្រតិកម្ម | កម្រិតសំឡេង |
| អតិផរណា | 0.5 មីលីលីត្រ |
| 0.4M សូដ្យូមកាបូន | 2.5 មីលីលីត្រ |
| សារធាតុ Folin phenol | 0.5 មីលីលីត្រ |
9. លាយឱ្យល្អមុននឹងដាក់ក្នុងទឹកដែលមានសីតុណ្ហភាព ៣៧ អង្សាសេ រយៈពេល ៣០ នាទី ។
10. OD៦៦០ត្រូវបានកំណត់ជា OD1;ក្រុមត្រួតពិនិត្យទទេ៖ សារធាតុរំលាយអង់ស៊ីមត្រូវបានប្រើដើម្បីជំនួសដំណោះស្រាយអង់ស៊ីមដើម្បីកំណត់ OD៦៦០ជា OD2, ΔOD=OD1-អូឌី2.
11. ខ្សែកោងស្តង់ដារ L-tyrosine៖ ដំណោះស្រាយ L-tyrosine កំហាប់ខុសគ្នា 0.5mL, 2.5mL សូដ្យូមកាបូន 0.4M, 0.5mL Folin phenol reagent នៅក្នុងបំពង់ centrifuge 5mL, incubate in 37℃ for 30mins, detect for OD៦៦០សម្រាប់ការផ្តោតអារម្មណ៍ផ្សេងគ្នានៃ L-tyrosine បន្ទាប់មកទទួលបានខ្សែកោងស្តង់ដារ Y = kX + b ដែល Y គឺជាកំហាប់ L-tyrosine X គឺ OD៦០០.
ការគណនា
2: បរិមាណសរុបនៃដំណោះស្រាយប្រតិកម្ម (ml)
0.5: បរិមាណនៃដំណោះស្រាយអង់ស៊ីម (mL)
0.5: បរិមាណរាវប្រតិកម្មដែលប្រើក្នុងការកំណត់ chromogenic (mL)
10: ពេលវេលាប្រតិកម្ម (នាទី)
Df៖ ការរំលាយច្រើន
Cកំហាប់អង់ស៊ីម (mg/mL)
តួលេខ
Fig.1 សំណល់ DNA
| គំរូ | Ave C4 | អាស៊ីត nucleic ការងើបឡើងវិញ (pg/mg) | ការងើបឡើងវិញ(%) | នុយក្លេអ៊ែរសរុប អាស៊ីត ( pg/mg) |
| ស.ប.ក | ២៤.៦៦ | ២.២៣ | 83% | ២.៦៨៧ |
| PRK+STD2 | ១៨.៧២៣ | 126.728 | — | — |
| ជំងឺកាមរោគ1 | ១២.៩៥៥ |
— |
— |
— |
| ជំងឺកាមរោគ ២ | 16 | |||
| STD3 | ១៩.១២៥ | |||
| ជំងឺកាមរោគ ៤ | ២៣.១៣៥ | |||
| ជំងឺកាមរោគ ៥ | ២៦.៦២៥ | |||
| RNA-Free H2O | មិនបានកំណត់ | — | — | — |
រូបភាពទី 2 pH ល្អបំផុត
រូបភាពទី 3 សីតុណ្ហភាពល្អបំផុត
រូបភាពទី 4 ស្ថេរភាព pH
រូបភាពទី 5 ស្ថេរភាពកំដៅ
Fig.6 ស្ថេរភាពការផ្ទុកនៅ 25 ℃
