Robustt Taq DNA Polymerase

Robustt Taq DNA Polymerase គឺជា DNA polymerase ដែលចាប់ផ្តើមក្តៅ។ផលិតផលនេះមិនត្រឹមតែអាចទប់ស្កាត់បានប្រសើរជាងមុននូវប្រតិកម្មមិនជាក់លាក់ដែលបណ្តាលមកពីការ annealing មិនជាក់លាក់នៃ primers ឬការប្រមូលផ្តុំ primer នៅក្នុងដំណើរការនៃការរៀបចំប្រព័ន្ធ PCR និងការពង្រីក។ដូច្នេះវាមានភាពជាក់លាក់ដ៏ល្អ និងមានប្រសិទ្ធភាពជាងមុនសម្រាប់ការពង្រីកគំរូនៃកំហាប់ទាប ហើយវាសមស្របសម្រាប់ប្រតិកម្មពង្រីក PCR ពហុគុណ។លើសពីនេះទៅទៀត ផលិតផលនេះមានសមត្ថភាពអនុវត្តបានល្អណាស់ ហើយលទ្ធផលពង្រីកមានស្ថេរភាពអាចទទួលបាននៅក្នុងប្រភេទផ្សេងៗនៃប្រតិកម្ម PCR ។

សមាសធាតុ

1.5 U/μL Robusstart Taq DNA polymerase

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ ឥតគិតថ្លៃ) (ជាជម្រើស)

3.25 mM MgCl₂(ស្រេចចិត្ត)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ ឥតគិតថ្លៃ) មិនមាន dNTP និង Mg²+ ទេ សូមបន្ថែម dNTPs និង MgCl₂នៅពេលរៀបចំប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម។

កម្មវិធីដែលបានណែនាំ

1.ការពង្រីកលឿន។

2.ការពង្រីកច្រើន។

3.ការពង្រីកដោយផ្ទាល់នៃឈាម, swabs និងគំរូផ្សេងទៀត។

4.ការរកឃើញជំងឺផ្លូវដង្ហើម។

លក្ខខណ្ឌផ្ទុក

-20°C សម្រាប់ការរក្សាទុករយៈពេលវែង គួរលាយបញ្ចូលគ្នាឱ្យបានល្អមុនពេលប្រើប្រាស់ ជៀសវាងការកកញឹកញាប់។

*ប្រសិនបើមានភ្លៀងធ្លាក់បន្ទាប់ពីទូរទឹកកក វាជារឿងធម្មតា។វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យរក្សាលំនឹងសីតុណ្ហភាពក្នុងបន្ទប់មុនពេលលាយ និងប្រើប្រាស់។

និយមន័យឯកតា

ឯកតាសកម្មមួយ (U) ត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណនៃអង់ស៊ីមដែលរួមបញ្ចូល 10 nmol នៃ deoxyribonucleotide ទៅក្នុងវត្ថុធាតុមិនរលាយអាស៊ីតនៅសីតុណ្ហភាព 74°C សម្រាប់រយៈពេល 30 នាទីដោយប្រើ DNA មេជីវិតឈ្មោលត្រី salmon ដែលបានធ្វើឱ្យសកម្មជាគំរូ/ primer ។

ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព

1.SDS-PAGE ភាពបរិសុទ្ធ electrophoretic ធំជាង 98% ។

2.ភាពរសើបនៃការពង្រីក, ការគ្រប់គ្រងជាបាច់ទៅបាច់, ស្ថេរភាព។

3.គ្មានសកម្មភាពនុយក្លេអ៊ែរ exogenous គ្មានការចម្លងរោគ endonuclease ឬ exonuclease

សេចក្តីណែនាំ

ការកំណត់ប្រតិកម្ម

កំណត់ចំណាំ៖

១) ក.សតិបណ្ដោះអាសន្នមិនមាន dNTP និង Mg²+ ទេ សូមបន្ថែម dNTPs និង MgCl₂នៅពេលរៀបចំប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម។

2) ខ.ប្រសិនបើប្រើសម្រាប់ qPCR/qRT-PCR ការស៊ើបអង្កេត fluorescent គួរតែត្រូវបានបន្ថែមទៅប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម។ជាធម្មតាកំហាប់បឋមចុងក្រោយនៃ 0.2 μM នឹងផ្តល់លទ្ធផលល្អ;ប្រសិនបើដំណើរការប្រតិកម្មខ្សោយ កំហាប់បឋមអាចត្រូវបានកែតម្រូវក្នុងចន្លោះ 0.2-1 μM។ការផ្តោតអារម្មណ៍ស៊ើបអង្កេតជាធម្មតាត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរក្នុងចន្លោះ 0.1-0.3 μM។ការពិសោធន៍ជម្រាលការផ្តោតអារម្មណ៍អាចត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីស្វែងរកការរួមបញ្ចូលគ្នាដ៏ល្អបំផុតនៃ primer និង probe ។

ពិធីការជិះកង់កម្ដៅ

កំណត់ចំណាំ

1.អត្រាពង្រីកនៃ DNA polymerase លឿនមិនគួរតិចជាង 1 kb/10 វិនាទីទេ។អត្រាការកើនឡើង និងការធ្លាក់ចុះនៃសីតុណ្ហភាព របៀបគ្រប់គ្រងសីតុណ្ហភាព និងប្រសិទ្ធភាពនៃចរន្តកំដៅនៃឧបករណ៍ PCR ផ្សេងៗគ្នាមានភាពខុសប្លែកគ្នាយ៉ាងខ្លាំង ដូច្នេះវាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យបង្កើនលក្ខខណ្ឌប្រតិកម្មដ៏ល្អប្រសើរសម្រាប់ឧបករណ៍ PCR ដែលមានល្បឿនលឿនជាក់លាក់។

2.ប្រព័ន្ធនេះអាចសម្របខ្លួនបានខ្ពស់ ជាមួយនឹងភាពជាក់លាក់ និងភាពប្រែប្រួលខ្ពស់។

3.ស័ក្តិសមសម្រាប់ប្រើជាសារធាតុរាវរក PCR ភាពរសើបខ្ពស់ និងអាចប្រើក្នុងប្រតិកម្មពង្រីក PCR ពហុគុណ។

4.5′ → 3′ សកម្មភាពប៉ូលីមែរ, 5′ → 3′ សកម្មភាព exonuclease;គ្មាន 3′→5′ សកម្មភាព exonuclease;គ្មានមុខងារអានអត្ថបទ។

5.សាកសមសម្រាប់ការធ្វើតេស្តគុណភាព និងបរិមាណនៃ PCR និង RT-PCR ។

6.ចុង 3′ នៃផលិតផល PCR គឺ A ដែលអាចត្រូវបានក្លូនដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងវ៉ិចទ័រ T ។

7.វិធីសាស្រ្តបីជំហានត្រូវបានណែនាំសម្រាប់ primers ដែលមានសីតុណ្ហភាព annealing ទាប ឬសម្រាប់ការពង្រីកនៃបំណែកដែលវែងជាង 200 bp ។