ភ្នាក់ងារបញ្ចេញគំរូ
ភ្នាក់ងារបញ្ចេញគំរូគឺសម្រាប់សេណារីយ៉ូវិភាគ POCT ម៉ូលេគុល។សម្រាប់ប្រព័ន្ធពីរនៃ LAMP amplification ផ្ទាល់ និង direct amplification PCR មិនចាំបាច់មានការទាញយកអាស៊ីត nucleic ទេ។lysate ឆៅនៃគំរូអាចត្រូវបានពង្រីកដោយផ្ទាល់ ហ្សែនគោលដៅអាចត្រូវបានរកឃើញយ៉ាងត្រឹមត្រូវ ពេលវេលានៃការរកឃើញគំរូអាចត្រូវបានខ្លីបន្ថែមទៀត ដែលផ្គូផ្គងយ៉ាងល្អឥតខ្ចោះទៅនឹងតម្រូវការកម្មវិធីនៃ POCT ម៉ូលេគុល។វាស័ក្តិសមសម្រាប់ការជូតច្រមុះ បំពង់ក និងប្រភេទគំរូផ្សេងៗ។សំណាកដែលបានដំណើរការអាចត្រូវបានប្រើដោយផ្ទាល់សម្រាប់ការរកឃើញ PCR ឬ LAMP បរិមាណនៃហ្វ្លុយអូរីតាមពេលវេលាជាក់ស្តែង ហើយលទ្ធផលដូចគ្នានឹងវិធីសាស្ត្រស្រង់ចេញធម្មតាអាចសម្រេចបានដោយមិនមានភាពស្មុគស្មាញនូវប្រតិបត្តិការទាញយកអាស៊ីត nucleic ។
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ដឹកជញ្ជូននិងរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។
ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព
ការរកឃើញមុខងារ - qPCR បរិមាណ៖ ប្រព័ន្ធ 800μl Sample Release Reagent ត្រូវបានពង្រីក
ជាមួយនឹង 1000 ច្បាប់ចម្លង Novel Pseudovirus គំរូសំណាកច្រមុះមួយ ដែលបណ្តាលឱ្យមានខ្សែកោងពង្រីកស្រដៀងគ្នា និងΔCt តម្លៃក្នុង ± 0.5 Ct ។
ដំណើរការសាកល្បងបន្ត
1. យក 800 μl Sample Release Reagent ហើយរាលដាលសូលុយស្យុងលីហ្សីសទៅក្នុងបំពង់សំណាក 1.5 mL
2. យកក្រដាសជូតមាត់ ឬទឹកជូតបំពង់ក ដោយប្រើក្រដាសជូតមាត់ នីតិវិធីសំណាកច្រមុះ៖ យកក្រដាសអនាម័យ រួចដាក់ចូលទៅក្នុងរន្ធច្រមុះ រំកិលបន្តិចម្តងៗ ដល់ជម្រៅប្រហែល 1.5 សង់ទីម៉ែត្រ បង្វិលថ្នមៗ 4 ដងទល់នឹងភ្នាសច្រមុះ អស់រយៈពេលជាង 15 វិនាទី។ បន្ទាប់មកធ្វើប្រតិបត្តិការដដែលៗនៅលើរន្ធច្រមុះម្ខាងទៀតដោយប្រើវិធីស្រូបទឹកដដែល។ នីតិវិធីសំណាកបំពង់ក៖ យកស្បៃមាប់មគ ហើយថ្នមៗ ជូតបំពង់កបំពង់ក និងជញ្ជាំង pharyngeal ខាងក្រោយឱ្យបានលឿន ៣ ដង។
៣.ដាក់ swab ភ្លាមៗនៅក្នុងបំពង់គំរូ។ក្បាល swab គួរតែត្រូវបានបង្វិល និងលាយបញ្ចូលគ្នានៅក្នុងដំណោះស្រាយស្តុកទុកយ៉ាងហោចណាស់ 30 វិនាទី ដើម្បីធានាថាគំរូត្រូវបានដកចេញយ៉ាងពេញលេញនៅក្នុងបំពង់គំរូ។
4. ការភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20 ~ 25 ℃) រយៈពេល 1 នាទី ការរៀបចំសតិបណ្ដោះអាសន្នលីហ្សីត្រូវបានបញ្ចប់។
5. ទាំងពីរប្រព័ន្ធ 25μl RT-PCR និង RT-LAMP គឺត្រូវគ្នាជាមួយនឹងចំនួន 10μl នៃការបន្ថែមគំរូសម្រាប់ការពិសោធន៍រាវរក។
កំណត់ចំណាំ
1. ចំនួនអប្បបរមានៃ lysate ផ្ទាល់គំរូដែលត្រូវគ្នាទៅនឹង swab តែមួយអាចត្រូវបានកែតម្រូវទៅ 400μl ដែលអាចត្រូវបានកែតម្រូវតាមតម្រូវការនៃការធ្វើតេស្ត។
2. នៅពេលដែលសំណាកត្រូវបានដំណើរការដោយ reagent បញ្ចេញសំណាក វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យធ្វើការសាកល្បងដំណាក់កាលបន្ទាប់ឱ្យបានឆាប់តាមដែលអាចធ្វើទៅបាន ចន្លោះពេលរង់ចាំគឺល្អជាង 1 ម៉ោង។
3. pH នៃ lysate គំរូគឺអាស៊ីត ហើយប្រព័ន្ធរាវរកត្រូវមានសតិបណ្ដោះអាសន្នជាក់លាក់មួយ។វាស័ក្តិសមសម្រាប់ការរកឃើញពន្លឺនៃ PCR, RT-PCR និង LAMP ភាគច្រើនជាមួយនឹង pH buffer ប៉ុន្តែមិនស័ក្តិសមសម្រាប់ការរកឃើញពណ៌របស់ LAMP ដោយគ្មានសតិបណ្ដោះអាសន្នទេ។
