កញ្ចប់ទាញយក DNA/RNA មេរោគ
កញ្ចប់នេះគឺសមរម្យសម្រាប់ការទាញយកយ៉ាងឆាប់រហ័សនៃ DNA/RNA មេរោគដែលមានភាពបរិសុទ្ធខ្ពស់ពីសំណាកដូចជា ថង់ច្រមុះ ថង់អនាម័យបរិស្ថាន សារធាតុកោសិកាកោសិកា និងសារធាតុ supernatants homogenate ជាលិកា។ឧបករណ៍នេះត្រូវបានផ្អែកលើបច្ចេកវិជ្ជាបន្សុតភ្នាសស៊ីលីកាដែលលុបបំបាត់តម្រូវការសម្រាប់ការប្រើប្រាស់សារធាតុរំលាយសរីរាង្គ phenol/chloroform ឬទឹកភ្លៀងជាតិអាល់កុលដែលប្រើប្រាស់ពេលវេលាដើម្បីទាញយក DNA/RNA មេរោគប្រកបដោយគុណភាពខ្ពស់។អាស៊ីត nucleic ដែលទទួលបានគឺមិនមានភាពមិនបរិសុទ្ធ និងត្រៀមខ្លួនជាស្រេចសម្រាប់ការប្រើប្រាស់នៅក្នុងការពិសោធន៍ខាងក្រោមដូចជាការចម្លងបញ្ច្រាស PCR, RT-PCR, real-time PCR, next-generation sequencing (NGS) និង Northern blot ។
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
រក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 15 ~ 25 ℃ និងដឹកជញ្ជូននៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់
សមាសធាតុ
| សមាសធាតុ | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 មីលីលីត្រ |
| Buffer RW | 120 មីលីលីត្រ |
| RNase-free ddH2 O | 6 មីលីលីត្រ |
| ជួរឈរ FastPure RNA | ១០០ |
| បំពង់ប្រមូល (2ml) | ១០០ |
| បំពង់ប្រមូលដោយគ្មាន RNase (1 .5ml) | ១០០ |
Buffer VL៖ផ្តល់បរិយាកាសសម្រាប់ lysis និងការចង។
Buffer RW៖យកប្រូតេអ៊ីនដែលនៅសេសសល់ និងសារធាតុមិនបរិសុទ្ធផ្សេងៗ។
ddH2O គ្មាន RNase៖បន្លិច DNA/RNA ពីភ្នាសក្នុងជួរឈរបង្វិល។
ជួរ FastPure RNA៖ជាពិសេសស្រូបយក DNA / RNA ។
បំពង់ប្រមូល 2 មីលីលីត្រ:ប្រមូលតម្រង។
RNase-free Collection Tubes 1.5ml:ប្រមូល DNA/RNA ។
កម្មវិធី
ថង់បំពង់ច្រមុះ ក្រដាសអនាម័យបរិស្ថាន សារធាតុចិញ្ចឹមកោសិកា និងកោសិកាដែលមានលក្ខណៈដូចគ្នាបេះបិទ។
Mater រៀបចំដោយខ្លួនឯង។អ៊ីល
គន្លឹះបំពង់គ្មាន RNase, 1.5ml RNase-free pipettes, centrifuge, vortex mixers, and pipettes.
ដំណើរការពិសោធន៍
អនុវត្តជំហានខាងក្រោមទាំងអស់នៅក្នុងគណៈរដ្ឋមន្ត្រីជីវសុវត្ថិភាព។
1. បន្ថែម 200 μl នៃសំណាកទៅបំពង់ RNase-free centrifuge (ផ្សំជាមួយ PBS ឬ 0.9% NaCl ក្នុងករណីមានសំណាកមិនគ្រប់គ្រាន់) បន្ថែម 500 μl នៃ Buffer VL លាយឱ្យល្អដោយ vortexing សម្រាប់រយៈពេល 15 - 30 វិនាទី និង centrifuge ក្នុងរយៈពេលខ្លីដើម្បីប្រមូលល្បាយនៅបាតបំពង់។
2. ដាក់ជួរឈរ FastPure RNA នៅក្នុងបំពង់ប្រមូល 2 មីលីលីត្រ។ផ្ទេរល្បាយពីជំហានទី 1 ទៅជួរ FastPure RNA, centrifuge នៅ 12,000 rpm (13,400 × g) រយៈពេល 1 នាទី ហើយបោះចោលតម្រង។
3. បន្ថែម 600 μl នៃ Buffer RW ទៅក្នុងជួរឈរ FastPure RNA, centrifuge នៅ 12,000 rpm (13,400 × g) រយៈពេល 30 វិនាទី ហើយបោះចោលតម្រង។
4. ធ្វើជំហានទី 3 ម្តងទៀត។
5. រំកិលជួរឈរទទេនៅ 12,000 rpm (13,400 × g) រយៈពេល 2 នាទី។
6. ដោយប្រុងប្រយ័ត្នផ្ទេរ FastPure RNA Columns ទៅក្នុងបំពង់ប្រមូលថ្មីដែលគ្មាន RNase 1.5 ml (ផ្តល់ជូនក្នុងកញ្ចប់) ហើយបន្ថែម 30 – 50 μl នៃ ddH2O ដែលគ្មាន RNase ទៅកណ្តាលនៃភ្នាសដោយមិនប៉ះជួរឈរ។អនុញ្ញាតឱ្យឈរនៅសីតុណ្ហភាពក្នុងបន្ទប់រយៈពេល 1 នាទី និង centrifuge នៅ 12,000 rpm (13,400 × g) រយៈពេល 1 នាទី។
7. បោះបង់ជួរឈរ FastPure RNA ។DNA/RNA អាចត្រូវបានប្រើដោយផ្ទាល់សម្រាប់ការធ្វើតេស្តជាបន្តបន្ទាប់ ឬរក្សាទុកនៅ -30 ~ -15°C ក្នុងរយៈពេលខ្លី ឬ -85 ~-65°C សម្រាប់រយៈពេលយូរជាងនេះ។
កំណត់ចំណាំ
សម្រាប់តែការស្រាវជ្រាវប៉ុណ្ណោះ។មិនមែនសម្រាប់ប្រើក្នុងដំណើរការរោគវិនិច្ឆ័យទេ។
1. លំនឹងគំរូទៅនឹងសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ជាមុន។
2. មេរោគគឺឆ្លងខ្លាំង។សូមប្រាកដថាការប្រុងប្រយ័ត្នសុវត្ថិភាពចាំបាច់ទាំងអស់ត្រូវបានធ្វើឡើងមុនពេលពិសោធន៍។
3. ជៀសវាងការត្រជាក់ម្តងហើយម្តងទៀត និងរលាយនៃសំណាក ព្រោះនេះអាចនាំទៅដល់ការរិចរិល ឬកាត់បន្ថយទិន្នផលនៃ DNA/RNA មេរោគដែលបានស្រង់ចេញ។
4. គ្រឿងបរិក្ខារដែលរៀបចំដោយខ្លួនឯងរួមមានគន្លឹះបំពង់គ្មាន RNase, 1.5ml RNase-free centrifuge tubes, centrifuge, vortex mixer, and pipettes ។
5. នៅពេលប្រើឧបករណ៍នេះ សូមពាក់អាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ ស្រោមដៃជ័រដែលអាចចោលបាន និងរបាំងដែលអាចចោលបាន ហើយប្រើសម្ភារៈប្រើប្រាស់ដែលមិនមាន RNase ដើម្បីកាត់បន្ថយហានិភ័យនៃការចម្លងរោគ RNase ។
6. អនុវត្តគ្រប់ជំហាននៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ លើកលែងតែមានការបញ្ជាក់ផ្សេងពីនេះ ។
យន្តការ និងលំហូរការងារ
