5 × Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG

លេខឆ្មា៖ HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) គឺជាល្បាយដែលមានមូលដ្ឋានលើការស៊ើបអង្កេតបំពង់មួយដែលមានស្ថេរភាពខ្ពស់ ដែលសមរម្យសម្រាប់ការចម្លងបញ្ច្រាសមួយជំហាន និង PCR បរិមាណ (qRT-PCR) ។វាគាំទ្រការលាយមុននៃ primers និង probes និងរក្សាស្ថេរភាពបន្ទាប់ពីការរក្សាទុករយៈពេលយូរនៅសីតុណ្ហភាពទាប។គំរូដែលត្រូវធ្វើតេស្តអាចត្រូវបានបន្ថែមដោយផ្ទាល់នៅពេលប្រើ ដោយមិនបាច់បើក/ដំណើរការបំពង់បន្ថែម។ផលិតផលនេះផ្តល់នូវសមាសធាតុដូចជា hot-start DNA polymerase, M-MLV, heat-labile uracil DNA glycosylase (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl₂, dNTPs (ជាមួយ dUTP ជំនួសឱ្យ dTTP) និងឧបករណ៍ទប់លំនឹង។ជាមួយនឹងការកែប្រែហ្សែនលឿន transcriptase និង DNA polymerase ដែលត្រូវបានកែប្រែហ្សែន វាអាចទៅរួចក្នុងការបញ្ចប់ PCR amplification ក្នុងរយៈពេល 20-40 នាទី។សារធាតុប្រតិកម្មនេះប្រើសតិបណ្ដោះអាសន្នពិសេសសម្រាប់ qPCR ជាមួយនឹងអង់ស៊ីមចម្រុះនៃអង់ស៊ីមពង្រីកការទប់ស្កាត់ និងអង់ស៊ីម UNG ។ដូច្នេះ វាអាចទទួលបានការពង្រីកដ៏ល្អនៃហ្សែនគោលដៅ និងការពារការពង្រីកមិនពិតដែលបណ្តាលមកពីសំណល់ PCR និងការបំពុលដោយ aerosol ។សារធាតុនេះអាចប្រើបានជាមួយឧបករណ៍ PCR បរិមាណហ្វ្លុយអូរីសភាគច្រើនពីក្រុមហ៊ុនផលិតដូចជា Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad និង Roche ។

សមាស​ភាគ

១.25 × Neoscript Fast RTase/UNG Mix

២.5 × Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)

លក្ខខណ្ឌផ្ទុក

សមាសធាតុទាំងអស់គួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -20 ℃សម្រាប់ការរក្សាទុករយៈពេលយូរនិង 4 ℃រហូតដល់ 3 ខែ។សូម​លាយ​ឱ្យ​បាន​ហ្មត់ចត់​បន្ទាប់​ពី​រលាយ និង​ផ្ចិត​មុន​នឹង​ប្រើ។ជៀសវាងការកកញឹកញាប់។

ការរៀបចំប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម qRT-PCR

1) ក.ការប្រមូលផ្តុំចុងក្រោយនៃ primer ជាធម្មតាគឺ 0.2μM។សម្រាប់លទ្ធផលកាន់តែប្រសើរ ការផ្តោតអារម្មណ៍បឋមអាចត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរក្នុងចន្លោះ 0.2-1μM។ជាទូទៅ កំហាប់ស៊ើបអង្កេតអាចត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរក្នុងចន្លោះ 0.1-0.3μM។

2) ខ.នៅពេលប្រើដំណើរការ PCR លឿន ការបង្កើនកំហាប់នៃ primers និង probes អាចបណ្តាលឱ្យមានលទ្ធផល amplification កាន់តែប្រសើរ ហើយសមាមាត្ររបស់ពួកគេគួរតែត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរទៅតាមនោះ។

3) ប្រភេទផ្សេងគ្នានៃគំរូមានប្រភេទផ្សេងគ្នានិងមាតិកានៃ inhibitor និងចម្លងចំនួននៃហ្សែនគោលដៅ។បរិមាណគំរូគួរតែត្រូវបានពិចារណាដោយលក្ខខណ្ឌជាក់ស្តែង។ធ្វើការរំលាយសំណាកដោយទឹកដែលគ្មានសារធាតុនុយក្លេអ៊ែរ ឬ TE Buffer បើចាំបាច់។

ប្រតិកម្ម គលក្ខខណ្ឌ

ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព

1.ការរកឃើញមុខងារ៖ ភាពរសើប ភាពជាក់លាក់ និងលទ្ធភាពធ្វើម្តងទៀតនៃ qPCR ។

២.គ្មានសកម្មភាពនុយក្លេអ៊ែរ exogenous: គ្មានការបំពុល endonuclease និង exonuclease ។

កំណត់ចំណាំ

១.អត្រាពង្រីកនៃ DNA polymerase លឿនគឺមិនតិចជាង 1kb/10s ទេ។ឧបករណ៍ PCR ផ្សេងៗគ្នាមានល្បឿនកំដៅ និងត្រជាក់ខុសៗគ្នា របៀបគ្រប់គ្រងសីតុណ្ហភាព និងចរន្តកំដៅ ហើយដូច្នេះការបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃកំហាប់ primer/probe របស់អ្នក និងវិធីសាស្ត្រដំណើរការក្នុងការរួមបញ្ចូលគ្នាជាមួយឧបករណ៍ PCR ជាក់លាក់របស់អ្នកគឺចាំបាច់ណាស់។

២.ផលិតផលនេះអនុវត្តបានទូលំទូលាយ ហើយវាសមស្របសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យម៉ូលេគុលដែលមានភាពប្រែប្រួលខ្ពស់។វិធីសាស្រ្ត PCR បីជំហានត្រូវបានណែនាំសម្រាប់ primers ដែលមានសីតុណ្ហភាព annealing ទាប ឬសម្រាប់ការពង្រីកនៃបំណែកវែងជាង 200 bp ។

៣.ដោយសារ amplicons ផ្សេងគ្នាមានប្រសិទ្ធភាពនៃការប្រើប្រាស់ខុសគ្នានៃ dUTP និងភាពប្រែប្រួលខុសៗគ្នាចំពោះ UNG នោះសារធាតុ reagents គួរតែត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរប្រសិនបើភាពប្រែប្រួលនៃការរកឃើញមានការថយចុះនៅពេលប្រើប្រព័ន្ធ UNG ។សូមទាក់ទងមកយើងខ្ញុំសម្រាប់ជំនួយបច្ចេកទេសប្រសិនបើចាំបាច់។

៤.ដើម្បីជៀសវាងការពង្រីកផលិតផល PCR ដែលអាចដឹកជញ្ជូនបាន តំបន់ពិសោធន៍ដែលខិតខំប្រឹងប្រែង និងបំពង់ត្រូវបានទាមទារសម្រាប់ការពង្រីក។ធ្វើប្រតិបត្តិការដោយប្រើស្រោមដៃ ហើយផ្លាស់ប្តូរញឹកញាប់ ហើយកុំបើកបំពង់ PCR បន្ទាប់ពីពង្រីក។