Bst 2.0 DNA Polymerase (គ្មានគ្លីសេរីន)
Bst DNA polymerase V2 គឺបានមកពី Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I ដែលមានសកម្មភាព 5′→3′ DNA polymerase និងសកម្មភាពជំនួសខ្សែសង្វាក់ខ្លាំង ប៉ុន្តែមិនមានសកម្មភាព 5′→3′ exonuclease ទេ។Bst DNA Polymerase V2 គឺសមស្របតាមឧត្ដមគតិសម្រាប់ការផ្លាស់ទីលំនៅ strand-displacement, isothermal amplification LAMP (loop mediated isothermal amplification) និងការបន្តបន្ទាប់គ្នាយ៉ាងឆាប់រហ័ស។
សមាសធាតុ
| សមាសភាគ | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (គ្មានគ្លីសេរីន) (8U/μL) | 0.2 មីលីលីត្រ | 1 មីលីលីត្រ | 10 មីលីលីត្រ |
| 10 × HC Bst V2 Buffer | 1.5 មីលីលីត្រ | 2 × 1.5 មីលីលីត្រ | 3 × 10 មីលីលីត្រ |
| MgSO៤(100 មីលីម៉ែត្រ) | 1.5 មីលីលីត្រ | 2 × 1.5 មីលីលីត្រ | 2 × 10 មីលីលីត្រ |
កម្មវិធី
1.LAMP isothermal amplification
2.DNA strand ប្រតិកម្មផ្លាស់ទីលំនៅតែមួយ
3. លំដាប់ហ្សែន GC ខ្ពស់។
4.DNA លំដាប់នៃកម្រិតណាណូក្រាម។
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ការដឹកជញ្ជូននៅក្រោម 0 ° C និងត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -25 ° C ~ -15 ° C ។
និយមន័យឯកតា
ឯកតាមួយត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណនៃអង់ស៊ីមដែលបញ្ចូល 25 nmol នៃ dNTP ទៅក្នុងសារធាតុមិនរលាយអាស៊ីតក្នុងរយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 65 អង្សាសេ។
ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព
1.ការវិភាគភាពបរិសុទ្ធនៃប្រូតេអ៊ីន (SDS-PAGE):ភាពបរិសុទ្ធនៃ Bst DNA polymerase V2 គឺ≥99% ត្រូវបានកំណត់ដោយការវិភាគ SDS-PAGE ដោយប្រើការរកឃើញ Coomassie Blue ។
2.សកម្មភាព Exonuclease:incubation នៃប្រតិកម្ម 50 μL ដែលមានអប្បរមានៃ 8 U នៃ Bst DNA polymerase V2 ជាមួយនឹង 1 μg λ -Hind Ⅲ រំលាយ DNA អស់រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃ លទ្ធផលមិនអាចរកឃើញការរិចរិលដូចដែលបានកំណត់នោះទេ។
3.សកម្មភាព Nickase:ការភ្ញាស់នៃប្រតិកម្ម 50 μL ដែលមានអប្បបរមា 8 U នៃ Bst DNA polymerase V2 ជាមួយនឹង 1 μg pBR322 DNA រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C នាំឱ្យមិនមានការរិចរិលដែលអាចរកឃើញដូចដែលបានកំណត់នោះទេ។
4.សកម្មភាព RNase:ការភ្ញាស់នៃប្រតិកម្ម 50 μL ដែលមានអប្បបរមា 8 U នៃ Bst DNA polymerase V2 ជាមួយនឹង 1.6 μg MS2 RNA រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C នាំឱ្យមិនមានការរិចរិលដែលអាចរកឃើញដូចដែលបានកំណត់នោះទេ។
5.E. coli DNA:120 U នៃ Bst DNA polymerase V2 ត្រូវបានពិនិត្យរកមើលវត្តមានរបស់ E. coli genomic DNA ដោយប្រើ TaqMan qPCR ជាមួយនឹង primers ជាក់លាក់សម្រាប់ទីតាំង E. coli 16S rRNA ។ការចម្លងរោគ DNA ហ្សែន E. coli គឺ ≤1 ចម្លង។
ប្រតិកម្មចង្កៀង
| សមាសធាតុ | ២៥μL |
| 10 × HC Bst V2 Buffer | 2.5 μL |
| MgSO4 (100 មីលីម៉ែត្រ) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM នីមួយៗ) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 បៃតង (25 ×)a | 1.0 μL |
| ល្បាយ primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (គ្មានគ្លីសេរីន) (8 U/uL) | 1 μL |
| គំរូ | × μL |
| ddH₂O | រហូតដល់ 25 μL |
កំណត់ចំណាំ៖
១) ក.SYTOTM 16 ពណ៌បៃតង (25 ×)៖ យោងតាមតម្រូវការពិសោធន៍ ថ្នាំពណ៌ផ្សេងទៀតអាចត្រូវបានប្រើជំនួស។
2) ខ.ល្បាយបឋម៖ ទទួលបានដោយការលាយ 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB និងបរិមាណផ្សេងទៀត។
ប្រតិកម្មនិងលក្ខខណ្ឌ
1 × HC Bst V2 Buffer សីតុណ្ហភាព incubation ស្ថិតនៅចន្លោះ 60°C និង 65°C។
ភាពអសកម្មនៃកំដៅ
80 ° C, 20 នាទី។
