M-MLV Reverse Transcriptase
RevScript Reverse transcriptase ត្រូវបានទទួលដោយបច្ចេកវិទ្យាវិស្វកម្មហ្សែន។វាមានសមត្ថភាពសំយោគ cDNA ខ្ពស់ ស្ថេរភាពកម្ដៅ និងកម្រិតសីតុណ្ហភាពប្រតិកម្ម (រហូតដល់ 60°C)។ផលិតផល cDNA សំយោគមានរហូតដល់ 10 kb ។វាបង្កើនភាពស្និទ្ធស្នាលនៃគំរូ និងសមរម្យសម្រាប់ការចម្លងបញ្ច្រាសនៃគំរូ RNA ដែលមានរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំស្មុគស្មាញ ឬហ្សែនចម្លងទាប។
សមាសធាតុ
| សមាសភាគ | HC២០០៣ ប៊ី-០១ (10,000U) | HC២០០៣ ប៊ី-០២ (5*10,000U) | HC២០០៣ ប៊ី-០៣ (200,000U) |
| RevScript Reverse Transcriptase (200U/μL) | 50 μL | 5 × 50 μL | 1 មីលីលីត្រ |
| 5 × RevScript Buffer | 250 μL | 1.25 មីលីលីត្រ | 5 មីលីលីត្រ |
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ផលិតផលនេះគួររក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព -25°C ~ -15°C រយៈពេល 2 ឆ្នាំ។
និយមន័យឯកតា
ឯកតាមួយរួមបញ្ចូល 1 nmol នៃ dTTP ទៅក្នុងវត្ថុធាតុមិនរលាយអាស៊ីតក្នុងរយៈពេល 10 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 37°C ដោយប្រើ Oligo(dT) ជាថ្នាំ primers ។
ការកំណត់ប្រតិកម្ម
1.Denaturation នៃ RNA template (ជំហាននេះគឺស្រេចចិត្ត ការ denaturation នៃ RNA template ជួយបើករចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំ ដែលនឹងធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវទិន្នផលនៃ cDNA strand ដំបូង។ )
| សមាសធាតុ | បរិមាណ (μL) |
| RNase ឥតគិតថ្លៃ ddH2O | ដល់ ១៣ |
| Oligo(dT)18 (50 μmol / L) ឬថ្នាំ primer ចៃដន្យ (50 μmol / L) ឬថ្នាំ primers ជាក់លាក់ហ្សែន (2 μmol/L) | 1 |
| ឬ ១ | |
| ឬ ១ | |
| គំរូ RNA | Xa |
កំណត់ចំណាំ៖
1) a: RNA សរុប: 1-5 ug ឬ mRNA: 1-500 ng
2) ដាំឱ្យពុះនៅសីតុណ្ហភាព 65°C រយៈពេល 5 នាទី បន្ទាប់មកផ្ទេរលើទឹកកកភ្លាមៗ ឱ្យត្រជាក់រយៈពេល 2 នាទី។ការប្រមូលផ្តុំដោយសង្ខេប ដើម្បីប្រមូលអង្គធាតុរាវប្រតិកម្ម បន្ថែមដំណោះស្រាយប្រតិកម្មប្រតិចារិកបញ្ច្រាសដូចបានបង្ហាញក្នុងតារាងខាងក្រោម។ច្របាច់បំពង់ថ្នមៗដើម្បីលាយ។
1. ការរៀបចំល្បាយប្រតិកម្ម (បរិមាណ 20 μL)
| សមាសធាតុ | បរិមាណ (μL) |
| ល្បាយនៃជំហានមុន។ | 13 |
| 5 × សតិបណ្ដោះអាសន្ន | 4 |
| ល្បាយ dNTP (10nmol/L) | 1 |
| ប្រតិចារិកបញ្ច្រាស (200 U/μL) | 1 |
| ថ្នាំទប់ស្កាត់ RNase (40 U/μL) | 1 |
1.អនុវត្តប្រតិកម្មក្រោមលក្ខខណ្ឌដូចខាងក្រោមៈ
| សីតុណ្ហភាព (°C) | ពេលវេលា |
| ២៥ អង្សាសេa | 5 នាទី |
| ៤២ អង្សាសេb | 15-30 នាទី។ |
| ៨៥ អង្សាសេc | 5 នាទី |
កំណត់ចំណាំ៖
១) ក.ការភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 25°C រយៈពេល 5 នាទីគឺតម្រូវឱ្យប្រើសម្រាប់តែការប្រើ hexamers ចៃដន្យប៉ុណ្ណោះ។សូមរំលងជំហាននេះ នៅពេលប្រើ Oligo (dT)18ឬហ្សែនជាក់លាក់ primer ។
2) ខ.សីតុណ្ហភាពប្រតិចារិកបញ្ច្រាសដែលបានណែនាំគឺ 42°C សម្រាប់គំរូដែលមានរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំស្មុគស្មាញ ឬមាតិកា GC ខ្ពស់ វាត្រូវបានណែនាំឲ្យបង្កើនសីតុណ្ហភាពប្រតិកម្មដល់ 50-55°C។
៣) គ.កំដៅនៅ 85°C រយៈពេល 5 នាទី ដើម្បីអសកម្ម បញ្ច្រាស transcriptase ។
4) ផលិតផលអាចត្រូវបានប្រើដោយផ្ទាល់នៅក្នុងប្រតិកម្ម PCR ឬ qPCR ឬរក្សាទុកនៅ -20 ° C សម្រាប់ការផ្ទុករយៈពេលខ្លី។វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យ aliguot ផលិតផល និងរក្សាទុកនៅ -80 ° C សម្រាប់ការផ្ទុករយៈពេលវែង។ជៀសវាងការកកញឹកញាប់។
5) ផលិតផលគឺសមរម្យសម្រាប់មួយជំហាន RT-qPCR វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យបន្ថែម 10-20 U reverse transcriptase សម្រាប់រាល់ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម 25μL ឬបង្កើនបរិមាណនៃ transcriptase បញ្ច្រាសតាមស្ថានភាពជាក់ស្តែង។
កំណត់ចំណាំ
1.សូមរក្សាកន្លែងពិសោធន៍ឱ្យស្អាត;ស្រោមដៃស្អាត និងរបាំងគួរពាក់អំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ។សម្ភារៈប្រើប្រាស់ទាំងអស់ដែលប្រើក្នុងការពិសោធន៍គួរតែមាន RNase ដោយឥតគិតថ្លៃដើម្បីការពារការចម្លងរោគ RNase ។
2. នីតិវិធីទាំងអស់គួរតែត្រូវបានអនុវត្តនៅលើទឹកកកដើម្បីការពារការរិចរិល RNA ។
3. គំរូ RNA ដែលមានគុណភាពខ្ពស់ត្រូវបានណែនាំ ដើម្បីធានាបាននូវប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់នៃការចម្លងបញ្ច្រាស។
4.ផលិតផលនេះគឺសម្រាប់ប្រើប្រាស់ក្នុងការស្រាវជ្រាវតែប៉ុណ្ណោះ។
5. សូមដំណើរការជាមួយអាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ និងស្រោមដៃដែលអាចចោលបាន ដើម្បីសុវត្ថិភាពរបស់អ្នក។
