Rnase Inhibitor (គ្មានគ្លីសេរីន)
Murine RNase inhibitor គឺជាថ្នាំទប់ស្កាត់ murine RNase ផ្សំឡើងវិញដែលបានបង្ហាញ និងបន្សុតចេញពី E.coli ។វាភ្ជាប់ទៅនឹង RNase A, B ឬ C ក្នុងសមាមាត្រ 1: 1 តាមរយៈការភ្ជាប់មិនមែន covalent ដោយហេតុនេះរារាំងសកម្មភាពរបស់អង់ស៊ីមទាំងបី និងការពារ RNA ពីការរិចរិល។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ វាមិនមានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹង RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H ឬ RNase ពី Aspergillus ទេ។ថ្នាំទប់ស្កាត់ Murine RNase ត្រូវបានធ្វើតេស្តដោយ RT-PCR, RT-qPCR និង IVT mRNA ហើយត្រូវគ្នាជាមួយការចម្លងបញ្ច្រាសពាណិជ្ជកម្មផ្សេងៗ DNA polymerases និង RNA polymerases ។
បើប្រៀបធៀបទៅនឹងថ្នាំទប់ស្កាត់ RNase របស់មនុស្ស ថ្នាំ murine RNase inhibitor មិនមានផ្ទុក cysteine ពីរដែលងាយនឹងអុកស៊ីតកម្មដែលបណ្តាលឱ្យអសកម្មនៃសារធាតុ inhibitor ។ដែលធ្វើឱ្យវាមានស្ថេរភាពនៅកំហាប់ទាបនៃ DTT (តិចជាង 1 mM) ។លក្ខណៈពិសេសនេះធ្វើឱ្យវាស័ក្តិសមសម្រាប់ប្រើក្នុងប្រតិកម្មដែលកំហាប់ខ្ពស់នៃ DTT គឺមិនល្អចំពោះប្រតិកម្ម (ឧទាហរណ៍ RT-PCR ពេលវេលាពិត)។
Aកម្មវិធី
ផលិតផលនេះអាចត្រូវបានប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងការពិសោធន៍ណាមួយដែលការជ្រៀតជ្រែក RNase គឺអាចធ្វើទៅបានដើម្បីជៀសវាងការរិចរិល RNA ដូចជា៖
1.First-strand សំយោគ cDNA, RT-PCR, RT-qPCR ជាដើម។
2. ការពារ RNA ពីការរិចរឹលនៅក្នុង vitro transcription/translation (ឧ. ការចម្លងមេរោគនៅក្នុង vitro);
3.Inhibition នៃសកម្មភាព RNase កំឡុងពេលផ្តាច់ RNA និងការបន្សុត។
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
រក្សាទុកនៅ -25 ~ 15 ℃;
វដ្តត្រជាក់ - thaw ≤ 5 ដង;
មានសុពលភាព 1 ឆ្នាំ។
និយមន័យឯកតា
ឯកតាមួយត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណនៃ RNase Inhibitor ដែលត្រូវការដើម្បីរារាំងសកម្មភាពនៃ 5 ng នៃ RNase A ដោយ 50% ។
ទម្ងន់ម៉ូលេគុល
RNase Inhibitor (គ្មានគ្លីសេរីន) គឺជាប្រូតេអ៊ីន 50 kDa ។
ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព
Exonuclease សកម្មភាព៖
ការភ្ញាស់អង់ស៊ីម 40 U ជាមួយនឹង 1 μg λ-Hind III រំលាយ DNA អស់រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C មិនបានបណ្តាលឱ្យមានការបំផ្លាញ DNA ដែលអាចរកឃើញដូចដែលកំណត់ដោយ gel electrophoresis ។
សកម្មភាព Endonuclease៖
ការភ្ញាស់អង់ស៊ីម 40 U ជាមួយនឹង 1 μg λ DNA រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C មិនបានបណ្តាលឱ្យមានការបំផ្លាញ DNA ដែលអាចរកឃើញដូចដែលកំណត់ដោយ gel electrophoresis ។
នីក សកម្មភាព៖
ការភ្ញាស់អង់ស៊ីម 40 U ជាមួយនឹង 1 μg pBR322 រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 អង្សារសេ មិនបានបណ្តាលឱ្យមានការបំផ្លាញ DNA ដែលអាចរកឃើញបានទេ ដូចដែលបានកំណត់ដោយ gel electrophoresis ។
RNase សកម្មភាព:
ការភ្ញាស់អង់ស៊ីម 40 U ជាមួយនឹង 1.6 μg MS2 RNA សម្រាប់រយៈពេល 4 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃ មិនបានបណ្តាលឱ្យមានការរិចរិលដែលអាចរកឃើញនៃ RNA ដូចដែលបានកំណត់ដោយ gel electrophoresis ។
E.coli DNA:
40 U នៃអង់ស៊ីមត្រូវបានរកឃើញដោយ TaqMan qPCR ។E.coli DNA គឺ ≤ 0. 1pg/40U។
Notes
1. កុំអង្រួន ឬកូរខ្លាំង ដើម្បីការពារអសកម្មអង់ស៊ីម។
2.RNase inhibitor មានសកម្មភាពនៅសីតុណ្ហភាពចាប់ពី 25 ℃ ដល់ 55 ℃ ហើយអសកម្មនៅ ≥65 ℃។
សកម្មភាពរបស់ RNase H, RNase 1, និង RNase T1 មិនត្រូវបានរារាំងទេ។
4. ជួរ pH សម្រាប់រារាំងសកម្មភាព RNase គឺធំទូលាយ (សកម្មនៅ pH 5-9) បង្ហាញសកម្មភាពអតិបរមានៅ pH 7-8 ។
