មួយជំហាន RT-qPCR SYBR Green Premix
លេខឆ្មា៖ HCB5140A
ជំហានមួយ RT-qPCR Syber Green Premix គឺសម្រាប់បរិមាណ fluorescence ដោយផ្អែកលើ SYBR Green I dye។ការប្រើប្រាស់ថ្នាំ primers ជាក់លាក់នៃហ្សែន ការចម្លងបញ្ច្រាស និងប្រតិកម្ម qPCR ត្រូវបានបញ្ចប់ក្នុងបំពង់តែមួយ ដោយលុបបំបាត់តម្រូវការសម្រាប់ប្រតិបត្តិការបើកគម្រប និងបំពង់ម្តងហើយម្តងទៀត ធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងយ៉ាងខ្លាំងនូវប្រសិទ្ធភាពនៃការវិភាគ និងកាត់បន្ថយហានិភ័យនៃការចម្លងរោគ។សម្រាប់សំណាក RNA ឧបករណ៍ប្រើប្រាស់ Reverse Transcriptase ដែលធន់នឹងកំដៅសម្រាប់ការសំយោគ cDNA ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព និង HotStart Taq DNA Polymerase សម្រាប់ការពង្រីកបរិមាណ។នៅក្រោមប្រព័ន្ធសតិបណ្ដោះអាសន្នដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរ ភាពប្រែប្រួលនៃឧបករណ៍អាចមានកម្រិតខ្ពស់រហូតដល់ 0.1 pg សម្រាប់គោលដៅដែលបានបង្ហាញខ្ពស់ និងខ្ពស់រហូតដល់ 1 pg សម្រាប់គោលដៅដែលបានបង្ហាញកម្រិតមធ្យម។កញ្ចប់នេះគឺសមរម្យសម្រាប់ការពង្រីក និងបរិមាណនៃគំរូ DNA ។វាអនុញ្ញាតឱ្យរកឃើញ និងកំណត់បរិមាណអាស៊ីត nucleic ដ៏រសើបពីគំរូរុក្ខជាតិ និងសត្វ កោសិកា និងមីក្រូសរីរាង្គផ្សេងៗ។
សមាសធាតុ
| No | ឈ្មោះ | កម្រិតសំឡេង | កម្រិតសំឡេង |
| 1 | បណ្តុំកម្រិតខ្ពស់ | 250 μL | 2 × 1.25 មីលីលីត្រ |
| 2 | ល្បាយអង់ស៊ីមកម្រិតខ្ពស់ | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase ឥតគិតថ្លៃ H2O | 250 μL | 2 × 1.25 មីលីលីត្រ |
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ផលិតផលនេះគួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -25 ~ -15 ℃ឆ្ងាយពីពន្លឺសម្រាប់រយៈពេល 1 ឆ្នាំ។
សេចក្តីណែនាំ
1. ការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធប្រព័ន្ធប្រតិកម្មd
| សមាសធាតុ | បរិមាណ (μL) | បរិមាណ (μL) | ការផ្តោតអារម្មណ៍ចុងក្រោយ |
| បណ្តុំកម្រិតខ្ពស់ | ១២.៥ | 25 | 1 × |
| ល្បាយអង់ស៊ីមកម្រិតខ្ពស់ | 1 | 2 | - |
| ប្រេងលាបមុខ (10 μmol/L)a | ០.៥ | 1 | 0.2 μmol / L |
| ថ្នាំ primer បញ្ច្រាស (10 μmol / L)a | ០.៥ | 1 | 0.2 μmol / L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase ឥតគិតថ្លៃ H2អូc | ទៅ 25 | ទៅ 50 | - |
កំណត់ចំណាំ៖
១) ក.ធកំហាប់ primer ចុងក្រោយគឺ 0.2 μmol/L ដែលអាចត្រូវបានកែតម្រូវក្នុងចន្លោះពី 0.1 និង 1μmol/L តាមភាពសមស្រប។
2) ខ.សារធាតុប្រតិកម្មគឺមានភាពរសើបខ្លាំងជាមួយនឹង RNA សរុបក្នុងជួរ 1pg-1μg ហើយការធ្វើតេស្តសំណាកមនុស្សបានបង្ហាញពីការបញ្ចូលដ៏ល្អប្រសើរនៃ 1 pg-100 ng ដោយគ្រប់គ្រងតម្លៃ Ct សរុបក្នុងចន្លោះពី 15-30 តាមភាពសមស្រប។
៣) គ.វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើ 20μL ឬ 50μL ដើម្បីធានាបាននូវសុពលភាព និងលទ្ធភាពផលិតឡើងវិញនៃការពង្រីកហ្សែនគោលដៅ។
៤) ឃ.សូមរៀបចំកៅអីដែលស្អាតបំផុត ហើយប្រើគន្លឹះគ្មានសំណល់នុយក្លេអ៊ែរ និងបំពង់ប្រតិកម្ម។ការណែនាំជាមួយប្រអប់ព្រីនធ័រត្រូវបានណែនាំ។ជៀសវាងការចម្លងរោគឆ្លង និងការចម្លងរោគ aerosol ។
2.កម្មវិធីប្រតិកម្ម
| ជំហានវដ្ត | សីតុណ្ហភាព | ពេលវេលា | វដ្ត |
| ប្រតិចារិកបញ្ច្រាស | 50 ℃a | 6 នាទី | 1 |
| ការប្រែពណ៌ដើម | ៩៥ អង្សាសេ | 5 នាទី | 1 |
| ប្រតិកម្មពង្រីក | ៩៥ អង្សាសេ | 15 វិ | 40 |
| 60 ℃b | 30 វិ | ||
| ដំណាក់កាលនៃការរលាយ | លំនាំដើមឧបករណ៍ | 1 | |
កំណត់ចំណាំ៖
១) ក.សីតុណ្ហភាពចម្លងបញ្ច្រាសអាចត្រូវបានជ្រើសរើសចន្លោះពី 50-55°C យោងតាមតម្រូវការពិសោធន៍។សម្រាប់គំរូ DNA ដំណើរការចម្លងបញ្ច្រាសអាចត្រូវបានលុបចោល។
2) ខ.ក្នុងករណីពិសេស សីតុណ្ហភាព annealing/extension អាចត្រូវបានកែតម្រូវតាមតម្លៃ primer Tm 60°C ត្រូវបានណែនាំ។
កំណត់ចំណាំ
1. ផលិតផលនេះគឺសម្រាប់ប្រើប្រាស់ក្នុងការស្រាវជ្រាវតែប៉ុណ្ណោះ។
2. សូមធ្វើប្រតិបត្តិការជាមួយអាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ និងស្រោមដៃដែលអាចចោលបាន ដើម្បីសុវត្ថិភាពរបស់អ្នក។
