Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
លេខឆ្មា៖ HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) គឺជាឧបករណ៍ PCR បរិមាណ multiplex ផ្អែកលើ RNA ជាគំរូ។នៅក្នុងដំណើរការនៃការពិសោធន៍ ការចម្លងបញ្ច្រាស និង PCR បរិមាណត្រូវបានអនុវត្តនៅក្នុងបំពង់តែមួយ ដែលសម្រួលដល់ប្រតិបត្តិការពិសោធន៍ និងកាត់បន្ថយហានិភ័យនៃការចម្លងរោគ។នៅក្នុងឧបករណ៍នេះ cDNA strand ដំបូងត្រូវបានសំយោគយ៉ាងមានប្រសិទ្ធភាពដោយ Reverse Transcriptase ដែលធន់នឹងកំដៅ និងពង្រីកបរិមាណដោយ HotStart Tag DNA Polymerase ។ឧបករណ៍នេះភាគច្រើនមានផ្ទុកនូវសតិបណ្ដោះអាសន្ន MP ដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរ ការលាយអង់ស៊ីម។ល។ ដំណោះស្រាយសតិបណ្ដោះអាសន្នមាន Mg រួចហើយ2+និង dNTP ។លើសពីនេះ កត្តាដែលអាចរារាំងការពង្រីក PCR ដែលមិនជាក់លាក់ជាក់លាក់ និងបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃការពង្រីកនៃប្រតិកម្ម qPCR ច្រើនត្រូវបានបន្ថែម ដែលអាចធានាបាននូវប្រសិទ្ធភាព amplification និងអនុវត្តរហូតដល់ប្រតិកម្ម amplification ច្រើន។ប្រព័ន្ធ dUTP/UDG ត្រូវបានបន្ថែម ដើម្បីការពារហានិភ័យនៃការចម្លងរោគ aerosol ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព។
សមាសធាតុ
1. សតិបណ្ដោះអាសន្ន
2. អង់ស៊ីមលាយ
ការបញ្ជាក់
| ចាប់ផ្តើមក្តៅ | ការចាប់ផ្តើមក្តៅដែលភ្ជាប់មកជាមួយ |
| វិធីសាស្រ្តរាវរក | ការស៊ើបអង្កេតបឋម |
| វិធីសាស្ត្រ PCR | ជំហានមួយ RT-qPCR |
| ប៉ូលីមឺរ៉ាស | តាក DNA polymerase |
| ប្រភេទនៃគំរូ | ឌីអិនអេ |
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ផលិតផលនេះត្រូវបានដឹកជញ្ជូនដោយទឹកកកស្ងួត ហើយអាចរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព -25 ~ -15 ℃ រយៈពេល 1 ឆ្នាំ។វាគួរតែជៀសវាងញឹកញាប់ត្រជាក់ - រលាយ។វាត្រូវបានណែនាំឱ្យរក្សាទុកដោយឡែកពីគ្នា។
សេចក្តីណែនាំ
1.ប្រតិកម្ម ប្រព័ន្ធ
| សមាសធាតុ | បរិមាណ (μL) | ការផ្តោតអារម្មណ៍ចុងក្រោយ |
| 2 × MP Buffer | ១២.៥ | 1 × |
| អង់ស៊ីមលាយ | 1 | - |
| ល្បាយ primer/Probe (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| គំរូ RNA | ១-១០ | - |
| RNase ឥតគិតថ្លៃ H2O | ទៅ 25 | - |
កំណត់ចំណាំ៖
ត្រូវប្រាកដថាលាយឱ្យបានល្អមុនពេលប្រើ ជៀសវាងពពុះច្រើនដែលបណ្ដាលមកពីរំញ័រខ្លាំង។
ក.ការផ្តោតអារម្មណ៍បឋម៖ ល្បាយ primer រួមទាំង primer multiplex អាស្រ័យលើស្ថានភាពដែលកំហាប់ primer ល្អបំផុតប្រហែលជាចន្លោះពី 0.l និង 1.0μM។
ខ.ការផ្តោតអារម្មណ៍នៃការស៊ើបអង្កេត៖ ល្បាយស៊ើបអង្កេត រួមទាំងភាពខុសគ្នានៃស្លាកសញ្ញាការស៊ើបអង្កេត multiplex ក្រុម fluorescent អាស្រ័យលើស្ថានភាព ការប្រមូលផ្តុំការស៊ើបអង្កេតដ៏ល្អប្រសើរប្រហែលជាចន្លោះពី 0.05 និង 0.5μM។
គ.ការរំលាយគំរូ៖ qPCR មានភាពរសើបខ្លាំង ហើយវាត្រូវបានណែនាំអោយរំលាយពុម្ព។តម្លៃ Ct នៃការគ្រប់គ្រងគឺសមរម្យរវាង 20 និង 35 ។
ឃ.ការរៀបចំប្រព័ន្ធ៖ សូមរៀបចំនៅក្នុងតារាងការងារដែលស្អាតខ្លាំង ហើយបំពង់ និងបំពង់ប្រតិកម្មដោយគ្មានសំណល់នុយក្លេអ៊ែ។វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើក្បាលកាំភ្លើងជាមួយនឹងធាតុតម្រង។ជៀសវាងការចម្លងរោគឆ្លង និងការចម្លងរោគ aerosol ។
2. ការជិះកង់ដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងពិធីការ
| វដ្ត ជំហាន | សីតុណ្ហភាព | ពេលវេលា | វដ្ត |
| ប្រតិចារិកបញ្ច្រាស | 50 ℃ក | 20 នាទី | 1 |
| ការប្រែពណ៌ដំបូង | ៩៥ អង្សាសេ | 5 នាទី | 1 |
| ប្រតិកម្មពង្រីក | ៩៥ អង្សាសេ | 15 វិ |
៤០-៤៥ |
| 60 ℃ b | 30 វិ c |
កំណត់ចំណាំ៖
ក.ការចម្លងបញ្ច្រាស៖ សីតុណ្ហភាពអាចជ្រើសរើស 42°C ឬ 50°C។
ខ.ប្រតិកម្ម Amplification: សីតុណ្ហភាពត្រូវបានកែតម្រូវតាមតម្លៃ Tm នៃ primers ដែលបានរចនា។
គ.ការទទួលបានសញ្ញា fluorescence៖ សូមកំណត់នីតិវិធីពិសោធន៍ដោយយោងទៅតាមតម្រូវការនៃសៀវភៅដៃឧបករណ៍។
កំណត់ចំណាំ
សូមពាក់ PPE ចាំបាច់ ដូចជាអាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ និងស្រោមដៃ ដើម្បីធានាបាននូវសុខភាព និងសុវត្ថិភាពរបស់អ្នក។
