អង់ស៊ីម UDG/UNG
UDG (uracil DNA glycosylase) អាចបំប្លែងអ៊ីដ្រូលីសនៃតំណភ្ជាប់ N-glycosidic រវាងមូលដ្ឋាន uracil និងឆ្អឹងខ្នងជាតិស្ករ-phosphate នៅក្នុង ssDNA និង dsDNA ។វាអាចគ្រប់គ្រងការបំពុលដោយ aerosol បានយ៉ាងងាយស្រួល ហើយសាកសមសម្រាប់ប្រព័ន្ធជីវវិទ្យាម៉ូលេគុលទូទៅដូចជា PCR, qPCR, RT-qPCR និង LAMP ។
លក្ខណៈបច្ចេកទេស
| ម៉ាស៊ីនកន្សោម | Recombinant E. coliwith uracil DNA glycosylase ហ្សែន |
| ទម្ងន់ម៉ូលេគុល | 24. 8kDa |
| ភាពបរិសុទ្ធ | ≥95% (SDS-PAGE) |
| ភាពអសកម្មនៃកំដៅ | 95 ℃, 5 ~ 10 នាទី។ |
| និយមន័យឯកតា | ឯកតាមួយ (U) ត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណនៃអង់ស៊ីមដែលត្រូវការសម្រាប់កាតាលីករអ៊ីដ្រូលីលីសនៃ dsDNA ដែលមានផ្ទុក l μg dU ក្នុងរយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 25 ℃។ |
ការផ្ទុក
ផលិតផលគួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -25 ℃ ~ -15 អង្សារសេសម្រាប់រយៈពេលពីរឆ្នាំ។
សេចក្តីណែនាំ
1.ការរៀបចំល្បាយប្រតិកម្ម PCR តាមប្រព័ន្ធខាងក្រោម
| សមាសធាតុ | បរិមាណ (μL) | ការផ្តោតអារម្មណ៍ចុងក្រោយ |
| 10 × PCR Buffer (Mg² + បូក) | 5 | 1 × |
| 25 mmol / LMgCl | 3 | 1.5 mmol / L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | ០,៦ មីល្លីលីត្រ / អិល |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | ០,២ មីល្លីលីត្រ / លីច |
| គំរូ DNA | X | - |
| ថ្នាំ primer1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol / L |
| ថ្នាំ primer 2 (10μmol / L) | 2 | 0.4 μmol / L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. ៥ | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | រហូតដល់ 50 | - |
ចំណាំ៖ យោងតាមតម្រូវការពិសោធន៍ ការផ្តោតអារម្មណ៍ចុងក្រោយនៃ dUTP អាចត្រូវបានកែតម្រូវក្នុងចន្លោះ 0.2-0.6 mmol/L និង 0.2 mmol/L dTTP អាចត្រូវបានបន្ថែមដោយជ្រើសរើស។
2.នីតិវិធីពង្រីក
| ជំហានវដ្ត | សីតុណ្ហភាព | ពេលវេលា | វដ្ត |
| ការបំផ្លាញគំរូដែលមាន dU | ២៥ អង្សាសេ | 10 នាទី | 1 |
| ការធ្វើឱ្យសកម្ម UDG, គំរូ denaturation ដំបូង | ៩៥ អង្សាសេ | 5-10 នាទី។ | 1 |
| ការប្រែពណ៌ | ៩៥ អង្សាសេ | 10 វិ |
៣០-៣៥ |
| ការស្រើបស្រាល | 60 ℃ | 20 វិ | |
| ផ្នែកបន្ថែម | ៧២ អង្សាសេ | 30 វិនាទី/គីឡូបៃ | |
| ផ្នែកបន្ថែមចុងក្រោយ | ៧២ អង្សាសេ | 5 នាទី | 1 |
ចំណាំ៖ ពេលវេលាប្រតិកម្មនៅសីតុណ្ហភាព 25°C អាចត្រូវបានកែតម្រូវក្នុងរយៈពេល 5-10 នាទី យោងទៅតាមតម្រូវការពិសោធន៍។
កំណត់ចំណាំ
1.UDG មានសកម្មភាពនៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្នប្រតិកម្ម PCR ភាគច្រើន។
2.អង់ស៊ីមគួរតែត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងប្រអប់ទឹកកក ឬនៅលើអាងងូតទឹកទឹកកកនៅពេលប្រើប្រាស់ ហើយគួររក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 20°C ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីប្រើប្រាស់។
3.សូមពាក់ PPE ចាំបាច់ អាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ និងស្រោមដៃ ដើម្បីធានាសុខភាព និងសុវត្ថិភាពរបស់អ្នក!
