Multiplex qPCR Probe Premix

លេខឆ្មា៖ HCB5051A

TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) គឺជាដំណោះស្រាយមុនសម្រាប់ការពង្រីក PCR បរិមាណ 2 × ពេលវេលាជាក់ស្តែង ដែលកំណត់លក្ខណៈដោយភាពប្រែប្រួលខ្ពស់ និងភាពជាក់លាក់ ដែលមានពណ៌ខៀវ និងមានប្រសិទ្ធិភាពនៃការបន្ថែមគំរូ។ផលិតផលនេះគឺជា 2×Mix ចំរុះមុន ដែលអាចអោយមានប្រតិកម្ម PCR បរិមាណ fluorescent ដល់ទៅ 4 នៅក្នុងប្រតិកម្មតែមួយបានយ៉ាងល្អ។ផលិតផលនេះមានវិធីសាស្ត្រអង្គបដិប្រាណដែលត្រូវបានកែប្រែហ្សែនទៅជាអង់ស៊ីម Taq ចាប់ផ្តើមក្តៅ ដោយធ្វើអោយប្រសើរឡើងយ៉ាងខ្លាំងនូវភាពរសើបនៃការពង្រីកនិងភាពជាក់លាក់។ក្នុងពេលជាមួយគ្នានេះ ផលិតផលនេះបានធ្វើឱ្យប្រសើរយ៉ាងខ្លាំងនូវសតិបណ្ដោះអាសន្នពហុប្រតិកម្ម ដែលអាចធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវប្រសិទ្ធភាពនៃការពង្រីកនៃប្រតិកម្ម និងលើកកម្ពស់ការពង្រីកដ៏មានប្រសិទ្ធភាពនៃគំរូដែលមានកំហាប់ទាប។ផលិតផលនេះអាចត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការវិភាគ genotyping និង multiplex quantitative ។

ការបញ្ជាក់

លក្ខខណ្ឌផ្ទុក

ផលិតផលត្រូវបានដឹកជញ្ជូនដោយទឹកកកស្ងួត ហើយអាចរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព -25 ~ -15 ℃ រយៈពេល 2 ឆ្នាំ។

សេចក្តីណែនាំ

1. ប្រតិកម្មប្រព័ន្ធ

កំណត់ចំណាំ៖លាយឱ្យបានហ្មត់ចត់មុនពេលប្រើ ដើម្បីជៀសវាងពពុះច្រើនពីការញ័រខ្លាំង។

ក.កំហាប់ primer៖ Primer Mix មាន primer ច្រើនគូ ដែលជាធម្មតា primer នីមួយៗនៅកំហាប់ចុងក្រោយនៃ 0.2 μmol/L ហើយក៏អាចកែតម្រូវបានរវាង 0.1 និង 0.5 μmol/L តាមភាពសមស្រប។

ខ.កំហាប់ការស៊ើបអង្កេត៖ Probe Mix ផ្ទុកនូវ probes ជាច្រើនដែលមានសញ្ញា fluorescence ខុសៗគ្នា ហើយកំហាប់នៃ probe នីមួយៗអាចត្រូវបានកែតម្រូវចន្លោះពី 50 ទៅ 250 nmol/L យោងទៅតាមស្ថានភាពជាក់លាក់។

១.Rox dye reference: វាត្រូវបានប្រើនៅលើឧបករណ៍ពង្រីក PCR ពេលវេលាពិតដូចជា Applied Biosystems ដើម្បីកែកំហុសនៃសញ្ញា fluorescence ដែលបង្កើតរវាងអណ្តូង។ផលិតផលនេះមិនមានឯកសារយោងពណ៌ Rox ទេ។Cas#10200 ត្រូវបានណែនាំប្រសិនបើចាំបាច់។

២.ការរំលាយគំរូ៖ qPCR មានភាពរសើបខ្លាំង ហើយវាត្រូវបានណែនាំអោយរំលាយពុម្ពសម្រាប់ប្រើប្រាស់។ប្រសិនបើគំរូគឺជាដំណោះស្រាយភាគហ៊ុន cDNA បរិមាណគំរូមិនគួរលើសពី 1/10 នៃបរិមាណសរុបទេ។

៣.ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម៖ 25μL, 30μL ឬ 50 μL ត្រូវបានណែនាំ ដើម្បីធានាបាននូវប្រសិទ្ធភាព និងលទ្ធភាពនៃការពង្រីកហ្សែនគោលដៅ។

៤.ការរៀបចំប្រព័ន្ធ៖ សូមរៀបចំនៅក្នុងកៅអីដែលស្អាតខ្លាំង ហើយប្រើគន្លឹះ និងបំពង់ប្រតិកម្មដោយគ្មានសំណល់នុយក្លេអ៊ែរ។វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យប្រើគន្លឹះជាមួយ cartridges តម្រង។ជៀសវាងការចម្លងរោគឆ្លង និងការចម្លងរោគ aerosol ។

២.កម្មវិធីប្រតិកម្ម

កំណត់ចំណាំ៖

1.Annealing/Extension: សីតុណ្ហភាព និងពេលវេលាអាចត្រូវបានកែតម្រូវបានសមស្របទៅតាមតម្លៃ primer Tm ដែលបានរចនាឡើង។

២.ការទទួលបានសញ្ញា fluorescence៖ ពេលវេលាទទួលបានសញ្ញា fluorescence ដែលត្រូវការសម្រាប់ឧបករណ៍រាវរក qPCR ខុសៗគ្នា សូមកំណត់ទៅតាមពេលវេលាកំណត់អប្បបរមា។ពេលវេលានៃឧបករណ៍ទូទៅមួយចំនួនត្រូវបានកំណត់ដូចខាងក្រោម:

20 វិ៖ Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 លឿន

31 វិ៖ Applied Biosystems 7300

32 វិ៖ Applied Biosystems 7500

កំណត់ចំណាំ

សូមពាក់ PPE ចាំបាច់ អាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ និងស្រោមដៃ ដើម្បីធានាសុខភាព និងសុវត្ថិភាពរបស់អ្នក!