2 × Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
លេខឆ្មា៖ HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) ត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីអនុវត្ត PCR ដោយផ្ទាល់ពីគំរូដោយគ្មានការទាញយក DNA ឬការរៀបចំគំរូ។សារធាតុប្រតិកម្មនេះមានផ្ទុកនូវ DNA polymerase ចាប់ផ្តើមក្តៅ, uracil DNA glycosylase (UNG), RNase Inhibitor, MgCl ។2, dNTPs (ជាមួយ dUTP ជំនួសឱ្យ dTTP) និង stabilizers សម្រាប់ PCR បរិមាណ (qPCR)។សារធាតុនេះធ្វើឱ្យមានភាពធន់នឹងសារធាតុ inhibitor ខ្ពស់ ហើយដូច្នេះវាអាចត្រូវបានអនុវត្តដោយផ្ទាល់ទៅនឹងការរកឃើញសំណាកដូចជា បំពង់ក ទឹកមាត់ ការប្រឆាំងនឹងឈាមទាំងមូល ប្លាស្មា និងសេរ៉ូមដោយគ្មានការទាញយក DNA ។សារធាតុ reagent ប្រើប្រាស់បណ្តុំកម្មសិទ្ធិសម្រាប់ qPCR ជាមួយនឹងអង់ស៊ីមចម្រុះនៃ DNA polymerase ប្រឆាំងនឹងការហាមឃាត់ និងអង់ស៊ីម UNG ។ដូច្នេះ វាអាចទទួលបានការពង្រីកដ៏ល្អនៃហ្សែនគោលដៅនៅក្នុងគំរូដែលមានសារធាតុ inhibitors និងរារាំងការពង្រីកវិជ្ជមានមិនពិតដែលបណ្តាលមកពីសំណល់ PCR និងការបំពុលដោយ aerosol ។សារធាតុនេះអាចប្រើបានជាមួយឧបករណ៍ PCR បរិមាណ fluorescent ភាគច្រើនដូចជា Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche ជាដើម។
សមាសធាតុ
1. 50 × SensiDirect Enzyme/UNG លាយ
2. 2× SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
សមាសធាតុទាំងអស់គួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -20 ℃សម្រាប់ការរក្សាទុករយៈពេលយូរនិង 4 ℃រហូតដល់ 3 ខែ។សូមលាយឱ្យបានហ្មត់ចត់បន្ទាប់ពីរលាយ និងផ្ចិតមុននឹងប្រើ។ជៀសវាងការកកញឹកញាប់។
ពិធីការជិះកង់
| ជំហាន | សីតុណ្ហភាព | ពេលវេលា | វដ្ត |
| ការរំលាយអាហារ | 50 ℃ | 2 នាទី | 1 |
| ការធ្វើឱ្យសកម្មប៉ូលីមែរ | ៩៥ អង្សាសេ | 1-5 នាទី។ | 1 |
| និស្ស័យ | ៩៥ អង្សាសេ | 10-20s | ៤០-៥០ |
| ការបន្ថែម/ការបន្ថែម | ៥៦-៦៤ អង្សាសេ | 20-60s |
ការណែនាំអំពីបំពង់
| សារធាតុប្រតិកម្ម | បរិមាណក្នុងមួយ ប្រតិកម្ម | បរិមាណក្នុងមួយប្រតិកម្ម | ការផ្តោតអារម្មណ៍ចុងក្រោយ |
| 2× SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1 × |
| 50 × SensiDirect Enzyme/UNG លាយ | 0.5µL | 1µL | 1 × |
| 25 × Primer-Probe Mix១, ២ | 1µL | 2µL | 1 × |
| គំរូ៣, ៤ | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| បរិមាណសរុប | 25 μL | 50 μL | - |
1. កំហាប់ចុងក្រោយនៃ primer ជាធម្មតាគឺ 0.2μM។សម្រាប់លទ្ធផលកាន់តែប្រសើរ ការផ្តោតអារម្មណ៍បឋមអាចត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរក្នុងចន្លោះ 0.2-1μM។
2. ជាទូទៅ កំហាប់ស៊ើបអង្កេតអាចត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរក្នុងចន្លោះ 0.1-0.3μM។កំហាប់ល្អបំផុតនៃការស៊ើបអង្កេតគឺទាក់ទងទៅនឹងឧបករណ៍ពង្រីក PCR ពេលវេលាពិតប្រាកដ ប្រភេទនៃការស៊ើបអង្កេត និងប្រភេទនៃសារធាតុដាក់ស្លាក fluorescent ។សូមមើលសៀវភៅដៃឧបករណ៍ ឬតម្រូវការជាក់លាក់នៃការស៊ើបអង្កេត fluorescent នីមួយៗ។
3. ប្រភេទផ្សេងគ្នានៃសំណាកមានប្រភេទផ្សេងគ្នា និងមាតិកានៃ inhibitor និងចម្លងចំនួននៃហ្សែនគោលដៅ។បរិមាណគំរូគួរតែត្រូវបានពិចារណាដោយលក្ខខណ្ឌជាក់ស្តែង។ធ្វើការរំលាយគំរូដោយបន្ថែមទឹកគ្មាននុយក្លេអ៊ែ ឬ TE Buffer បើចាំបាច់។
4. បរិមាណដែលបានណែនាំនៃគំរូផ្សេងៗគ្នា៖
| គំរូ | បរិមាណសម្រាប់មួយ 50 μL ប្រតិកម្ម | អតិបរមា សមាមាត្រ |
| Anticoagulated ឈាមទាំងមូល | 2.5 μL | 5% |
| ប្លាស្មា | 15 μL | 30% |
| សេរ៉ូម | 10 μL | 20% |
| ជូតបំពង់ក | 10 μL | 20% |
| ទឹកមាត់ | 10 μL | 20% |
ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព
1. ការរកឃើញមុខងារ៖ ភាពរសើប ភាពជាក់លាក់ និងលទ្ធភាពនៃការធ្វើម្តងទៀតនៃ qPCR ។
2. គ្មានសកម្មភាពនុយក្លេអ៊ែរ exogenous: គ្មានការបំពុល exogenous endonuclease និង exonuclease ។
ចំណាំនៃផលិតផល
1. ផលិតផលនេះប្រើប្រាស់ប្រភេទថ្មីនៃ DNA polymerase ដែលចាប់ផ្តើមក្តៅ ដែលអាចត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្មក្នុងរយៈពេល 1-5 នាទី។ ចាប់តាំងពីសតិបណ្ដោះអាសន្នប្រតិកម្មរបស់វាត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរ វាកាន់តែសមស្របសម្រាប់ PCR បរិមាណ fluorescence ទ្វេរដង ឬច្រើនដោយប្រើវិធីសាស្ត្រស៊ើបអង្កេត។
2. ប្រសិនបើតម្លៃ Rn នៃ PCR amplification ទាបពេក ឬ amplification ត្រូវបានរារាំងជាក់ស្តែង ការថយចុះបរិមាណគំរូ ការបង្កើនបរិមាណប្រតិកម្ម ឬការថយចុះនៃគំរូពីមុនអាចធ្វើអោយលទ្ធផលប្រសើរឡើង។
3. ការប្រមូលឈាម ទឹកមាត់ ទឹកនោម បំពង់ក ជាដើម គួរអនុវត្តតាមលក្ខខណ្ឌតម្រូវរបស់គ្លីនិក ហើយសំណាកស្រស់អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីការពារការបំផ្លាញអាស៊ីត nucleic ។
4. ដោយសារ amplicons ផ្សេងគ្នាមានប្រសិទ្ធភាពក្នុងការប្រើប្រាស់ខុសៗគ្នាចំពោះ dUTP និងភាពរសើបចំពោះ UNG នោះ reagents គួរតែត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរប្រសិនបើភាពប្រែប្រួលនៃការរកឃើញមានការថយចុះនៅពេលប្រើប្រព័ន្ធ UNG ។សូមទាក់ទងមកយើងខ្ញុំសម្រាប់ជំនួយបច្ចេកទេសប្រសិនបើចាំបាច់។
5. ដើម្បីជៀសវាងការពង្រីកផលិតផល PCR ដែលអាចដឹកជញ្ជូនបានរវាងប្រតិកម្មមួយជំហាន តំបន់ពិសោធន៍ និងបំពង់ត្រូវបានទាមទារសម្រាប់ការពង្រីក។ធ្វើប្រតិបត្តិការដោយប្រើស្រោមដៃ ហើយផ្លាស់ប្តូរញឹកញាប់ ហើយកុំបើកបំពង់ប្រតិកម្មបន្ទាប់ពីការពង្រីក PCR ។
