DNase I (Rnase Free) (5u/ul)
លេខឆ្មា៖ HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) គឺជា endodeoxyribonuclease ដែលអាចរំលាយ DNA តែមួយ ឬពីរដង។វាទទួលស្គាល់ និងបំបែកចំណង phosphodiester ដើម្បីផលិត monodeoxynucleotides ឬ oligodeoxynucleotides តែមួយ ឬពីរដងជាមួយក្រុមផូស្វាតនៅស្ថានីយ 5'- និង hydroxyl នៅស្ថានីយ 3'-។សកម្មភាពរបស់ DNase I អាស្រ័យលើ Ca2+និងអាចត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្មដោយអ៊ីយ៉ុងដែក divalent ដូចជា Mn2+និង Zn2+.5 mM Ca2+ការពារអង់ស៊ីមពី hydrolysis ។នៅក្នុងវត្តមានរបស់ Mg2+អង់ស៊ីមអាចសម្គាល់ដោយចៃដន្យ និងបំបែកគេហទំព័រណាមួយនៅលើខ្សែ DNA ណាមួយ។នៅចំពោះមុខលោក Mn2+, ខ្សែ DNA ទ្វេរដងអាចត្រូវបានទទួលស្គាល់ និងកាត់ដំណាលគ្នានៅទីតាំងស្ទើរតែដូចគ្នាដើម្បីបង្កើតជាបំណែក DNA ចុងសំប៉ែត ឬបំណែក DNA ចុងស្អិតដែលមាននុយក្លេអូទីត 1-2 លេចចេញមក។
សមាសធាតុ
| ឈ្មោះ | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 គុ |
| DNase I, RNase-free | 20μL | 200 μL | 1 មីលីលីត្រ | 10 មីលីលីត្រ |
| 10 × DNase I Buffer | 1 មីលីលីត្រ | 1 មីលីលីត្រ | 5 × 1 មីលីលីត្រ | 5 × 10 មីលីលីត្រ |
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
-25 ℃ ~ -15 ℃សម្រាប់ផ្ទុក;ការដឹកជញ្ជូននៅក្រោមកញ្ចប់ទឹកកក។
សេចក្តីណែនាំ
1. រៀបចំដំណោះស្រាយប្រតិកម្មនៅក្នុងបំពង់គ្មាន RNase តាមសមាមាត្រដែលបានរាយខាងក្រោម៖
| សមាសភាគ | កម្រិតសំឡេង |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNase I, RNase-free (5U/μL) | 1 U ក្នុងមួយµg RNA① |
| ddH2O | រហូតដល់ 10 μL |
ចំណាំ៖ ①គណនាបរិមាណ DNase I ដែលត្រូវការបន្ថែមដោយផ្អែកលើបរិមាណ RNA ។
2. 37 ℃សម្រាប់ 15 នាទី;
3. បន្ថែម 0.5M EDTA ទៅកំហាប់ចុងក្រោយនៃ 2.5mM ~ 5mM ហើយកំដៅនៅ 65 ℃ សម្រាប់រយៈពេល 10 នាទីដើម្បីបញ្ឈប់ប្រតិកម្ម។គំរូអាចត្រូវបានប្រើដោយផ្ទាល់សម្រាប់ប្រតិកម្មបន្ទាប់ដូចជាការចម្លងបញ្ច្រាសពិសោធន៍។
និយមន័យឯកតា
ឯកតាមួយត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណអង់ស៊ីមដែលនឹងបង្ខូចកម្រិត 1µg នៃ pBR322 ទាំងស្រុងDNA ក្នុងរយៈពេល 10 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃។
ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព
RNase៖5U នៃ DNase I ជាមួយ 1.6µg MS2 RNA សម្រាប់រយៈពេល 4 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃ ផ្តល់ទិន្នផលគ្មានការរិចរិលដូចកំណត់ដោយ electrophoresis ជែល agarose ។
កំណត់ចំណាំ
1. សូមរៀបចំ 0.5MEDTA ដោយខ្លួនឯង។
2. ប្រើ 1U DNase I ក្នុង µg នៃ RNA ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ ប្រសិនបើ RNA តិចជាង 1µg សូមប្រើ 1U DNase I ។
3. សូមដាក់អង់ស៊ីមនៅលើទឹកកកកំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ។
