Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (ការកែប្រែអង្គបដិប្រាណ) គឺជា DNA polymerase ដែលអាចកម្តៅបានដោយចាប់ផ្តើមក្តៅពី Thermus aquaticus YT-1 ដែលមានសកម្មភាព 5′ → 3′ polymerase និងសកម្មភាព 5′ flap endonuclease ។ការចាប់ផ្តើមក្តៅ Taq DNA polymerase គឺជា Taq DNA polymerase ដែលកែប្រែដោយអង្គបដិបក្ខ thermolabile Taq ។ការកែប្រែអង្គបដិប្រាណបានបង្កើនភាពជាក់លាក់ ភាពប្រែប្រួល និងទិន្នផលនៃ PCR ។
សមាសធាតុ
| សមាសភាគ | HC១០១២ ក-០១ | HC១០១២ ក-០២ | HC១០១២ ក-០៣ | HC១០១២ ក-04 |
| 5 × HC Taq Buffer | 4 × 1 មីលីលីត្រ | 4 × 10 មីលីលីត្រ | 4 × 50 មីលីលីត្រ | 5 × 400 មីលីលីត្រ |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (អង្គបដិប្រាណបានកែប្រែ) (5 U/μL) | 0.1 មីលីលីត្រ | 1 មីលីលីត្រ | 5 មីលីលីត្រ | 10 × 5 មីលីលីត្រ |
កម្មវិធី
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 នៅ 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 និង 50% Glycerol ។
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ការដឹកជញ្ជូននៅក្រោម 0 ° C និងត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -25 ° C ~ -15 ° C ។
និយមន័យឯកតា
ឯកតាមួយត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណនៃអង់ស៊ីមដែលរួមបញ្ចូល 15 nmol នៃ dNTP ទៅក្នុងវត្ថុធាតុមិនរលាយអាស៊ីតក្នុងរយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 75 អង្សាសេ។
ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព
1.Endសកម្មភាព onuclease:ការភ្ញាស់អង់ស៊ីម 20 U ជាមួយនឹង 4 μg pUC19 DNA រយៈពេល 4 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃ មិនបានបណ្តាលឱ្យមានការបំផ្លាញ DNA ដែលអាចរកឃើញដូចដែលកំណត់ដោយ gel electrophoresis ។
2.5 kb Lambda PCR:25 វដ្តនៃការពង្រីក PCR នៃ 5 ng Lambda DNA ជាមួយនឹង 1.25 ឯកតានៃ Taq DNA Polymerase នៅក្នុងវត្តមាននៃ 200 µM dNTPs និង primers 0.2 µM បណ្តាលឱ្យផលិតផល 5 kb ដែលរំពឹងទុក។
3.សកម្មភាព Exonuclease:ការភ្ញាស់នៃប្រតិកម្ម 50 µl ដែលមានអប្បរមានៃ 12.5 U នៃ Taq DNA Polymerase ជាមួយនឹង 10 nmol 5´-FAM oligonucleotide រយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃ ផ្តល់លទ្ធផលមិនឃើញការរិចរិលដែលអាចរកឃើញបានទេ។
4.សកម្មភាព RNase:ការភ្ញាស់នៃប្រតិកម្ម 10 µL ដែលមានអង់ស៊ីម 20 U ជាមួយនឹង 1μg នៃ RNA transcripts រយៈពេល 2 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 អង្សារសេ មិនបានបណ្តាលឱ្យមានការរិចរិលនៃ RNA ដែលអាចរកឃើញដូចដែលកំណត់ដោយ gel electrophoresis ។
5.ភាពអសកម្មនៃកំដៅ៖ទេ
ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម
| សមាសធាតុ | កម្រិតសំឡេង |
| គំរូ DNAa | ស្រេចចិត្ត |
| 10 μM Forward Primer | 0.5 μL |
| ថ្នាំ primer បញ្ច្រាស 10 μM | 0.5 μL |
| dNTP Mix (10mM នីមួយៗ) | 0.5 μL |
| 5 × HC Taq Buffer | 5 μL |
| តាក DNA Polymeraseខ(5U/μL) | 0.125 μL |
| ទឹកគ្មានជាតិគីមី | រហូតដល់ 25 μL |
កំណត់ចំណាំ៖
១) ក.
| ឌីអិនអេ | ចំនួនទឹកប្រាក់ |
| ហ្សែន | 1 ng-1 μg |
| Plasmid ឬ Viral | 1 pg-1 ng |
2) ខ.កំហាប់ល្អបំផុតនៃ Taq DNA Polymerase អាចមានចាប់ពី 5-50 units/mL (0.1-0.5 units/25 µL reaction) ក្នុងកម្មវិធីឯកទេស។
ពិធីការជិះកង់កម្ដៅ
PCR
| ជំហាន | សីតុណ្ហភាព(°C) | ពេលវេលា | វដ្ត |
| ការប្រែពណ៌ដើមa | 95 ℃ | 1-3 នាទី។ | - |
| ការប្រែពណ៌ | 95 ℃ | ១៥-៣០ ស | 30-35 វដ្ត |
| ការស្រើបស្រាលខ | 45-68 ℃ | ១៥-៦០ ស | |
| ផ្នែកបន្ថែម | 68 ℃ | 1 គីឡូបៃ / នាទី | |
| ផ្នែកបន្ថែមចុងក្រោយ | 68 ℃ | 5 នាទី | - |
កំណត់ចំណាំ៖
1) ការប្រែពណ៌ដំបូង 1 នាទីនៅ 95 ° C គឺគ្រប់គ្រាន់សម្រាប់ការពង្រីកភាគច្រើន។សម្រាប់គំរូដែលពិបាកប្រើ ការប្រែពណ៌យូរជាងនេះ 2-3 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 95°C ត្រូវបានណែនាំ។ជាមួយនឹង PCR អាណានិគម ការប្រែពណ៌ 5 នាទីដំបូងនៅ 95 ° C ត្រូវបានណែនាំ។
2) ជំហាន annealing ជាធម្មតា 15-60 s ។សីតុណ្ហភាព Annealing គឺផ្អែកលើ Tm នៃ primer pair ហើយជាធម្មតាគឺ 45-68 ℃។
