រីណាស អេ
Ribonuclease A(RNaseA) គឺជាសារធាតុ polypeptide ខ្សែតែមួយដែលមានចំណង disulfide ចំនួន 4 ដែលមានទម្ងន់ម៉ូលេគុលប្រហែល 13.7 kDa ។RNase Ais ជា endoribonuclease ដែលបំផ្លាញ RNA ខ្សែតែមួយនៅសំណល់ C និង U ។ជាក់លាក់ ការបំបែកទទួលស្គាល់ចំណង phosphodiester ដែលបង្កើតឡើងដោយ 5'-ribose នៃ nucleotide និងក្រុម phosphate នៅលើ 3'-ribose នៃ pyrimidine nucleotide ដែលនៅជាប់គ្នា ដូច្នេះ phosphates 2,3'-Cyclic ត្រូវបាន hydrolyzed ទៅ 3 ដែលត្រូវគ្នា។ ផូស្វ័រ nucleoside (ឧទាហរណ៍ pG-pG-pC-pA-pG ត្រូវបានបំបែកដោយ RNase A ដើម្បីបង្កើត pG-pG-pCp និង A-PG) ។RNase A គឺសកម្មបំផុតក្នុងការបំបែក RNA តែមួយខ្សែ។កំហាប់ការងារដែលបានណែនាំគឺ 1- 100 μ G / mL ដែលអាចប្រើបានជាមួយប្រព័ន្ធប្រតិកម្មផ្សេងៗ។កំហាប់អំបិលទាប (0-100 mM NaCl) អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីកាត់ខ្សែ RNA តែមួយខ្សែ RNA ពីរខ្សែ និងខ្សែសង្វាក់ RNA ដែលបង្កើតឡើងដោយការបង្កាត់ RNA-DNA ។
ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ នៅកំហាប់អំបិលខ្ពស់ (≥0.3 M) RNase A ពិសេសបំបែក RNA តែមួយខ្សែប៉ុណ្ណោះ។
RNase A ត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅបំផុតដើម្បីយក RNA ចេញកំឡុងពេលរៀបចំ plasmid DNA ឬ genomic DNA ។ថាតើ DNase សកម្មឬអត់ក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការរៀបចំអាចប៉ះពាល់ដល់ប្រតិកម្មយ៉ាងងាយស្រួល។វិធីសាស្រ្តប្រពៃណីនៃការដាំឱ្យពុះក្នុងទឹកងូតទឹកអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីអសកម្មសកម្មភាព DNase ។ផលិតផលនេះមិនមានផ្ទុក DNase និង protease ហើយមិនត្រូវការការព្យាបាលកំដៅមុនពេលប្រើ។លើសពីនេះទៀត ផលិតផលនេះក៏អាចត្រូវបានប្រើនៅក្នុងការពិសោធន៍ជីវវិទ្យាម៉ូលេគុលដូចជាការវិភាគការការពារ RNase និងការវិភាគលំដាប់ RNA ផងដែរ។
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ផលិតផលគួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -25 ℃ ~ - 15 ℃សម្រាប់រយៈពេល 2 ឆ្នាំ។
លក្ខណៈបច្ចេកទេស
| រូបរាង | ម្សៅ |
| បរិមាណ | 100mg / 1 ក្រាម។ |
| ប្រភេទផលិតផល | RNase A |
សេចក្តីណែនាំ
នេះគឺជាវិធីសាស្រ្តទូទៅមួយសម្រាប់ការរៀបចំដំណោះស្រាយការផ្ទុក RNase A ។វាក៏អាចត្រូវបានរៀបចំផងដែរ។ដោយវិធីសាស្រ្តផ្សេងទៀតយោងទៅតាមវិធីសាស្រ្តប្រពៃណីនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ឬអក្សរសិល្ប៍យោង (ដូចជារំលាយដោយផ្ទាល់ក្នុង 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 ឬដំណោះស្រាយ Tris-NaCl)
1. ប្រើ 10 mM sodium acetate (pH 5.2) ដើម្បីរៀបចំ 10 mg/mL នៃដំណោះស្រាយផ្ទុក RNase A ។
2. កំដៅនៅ 100 ℃ សម្រាប់ 15 នាទី។
3. ត្រជាក់ដល់សីតុណ្ហភាពបន្ទប់ បន្ថែមបរិមាណ 1/10 នៃ 1 M Tris-HCl (pH 7.4) លៃតម្រូវ pH របស់វាទៅ 7.4 (សម្រាប់ឧទាហរណ៍ បន្ថែម 500 mL នៃ 10 mg/mL RNase storage solution 1 M Tris-HCl, pH7.4)។
4. កញ្ចប់រងនៅ -20 ℃សម្រាប់ការផ្ទុកទឹកកកដែលអាចមានស្ថេរភាពរហូតដល់ 2 ឆ្នាំ។
[កំណត់សម្គាល់]៖
នៅពេលពុះសូលុយស្យុង RNaseA ក្រោមលក្ខខណ្ឌអព្យាក្រឹត ទឹកភ្លៀង RNase នឹងបង្កើត។ដាំឱ្យពុះនៅកម្រិត pH ទាប ហើយប្រសិនបើមានទឹកភ្លៀង វាអាចត្រូវបានគេសង្កេតឃើញ ដែលអាចបណ្តាលមកពីវត្តមានរបស់ប្រូតេអ៊ីនមិនបរិសុទ្ធ។ប្រសិនបើដីល្បាប់ត្រូវបានរកឃើញបន្ទាប់ពីឆ្អិន ភាពមិនបរិសុទ្ធអាចត្រូវបានយកចេញដោយការ centrifugation ល្បឿនលឿន (13000rpm) ហើយបន្ទាប់មកដាក់កញ្ចប់រងសម្រាប់ការផ្ទុកត្រជាក់។
កំណត់ចំណាំ
សូមពាក់ PPE ដែលចាំបាច់ អាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ និងស្រោមដៃ ដើម្បីធានាសុខភាព និងសុវត្ថិភាពរបស់អ្នក។
