Wild Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase គឺជា DNA polymerase ដែលអាចទប់ទល់បានពី Thermus aquaticus YT-1 ដែលមានសកម្មភាព 5′ → 3′ polymerase និងសកម្មភាព 5′ flap endonuclease ។
សមាសធាតុ
| សមាសភាគ | HC1010A-០១ | HC1010A-០២ | HC1010A-០៣ | HC1010A-04 |
| 10 × Taq Buffer | 2 × 1 មីលីលីត្រ | 2 × 10 មីលីលីត្រ | 2 × 50 មីលីលីត្រ | 5 × 200 មីលីលីត្រ |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.1 មីលីលីត្រ | 1 មីលីលីត្រ | 5 មីលីលីត្រ | 5 × 10 មីលីលីត្រ |
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ការដឹកជញ្ជូននៅក្រោម 0 ° C និងត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -25 ° C ~ -15 ° C ។
និយមន័យឯកតា
ឯកតាមួយត្រូវបានកំណត់ថាជាបរិមាណនៃអង់ស៊ីមដែលរួមបញ្ចូល 15 nmol នៃ dNTP ទៅក្នុងវត្ថុធាតុមិនរលាយអាស៊ីតក្នុងរយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 75 អង្សាសេ។
ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព
1.ការវិភាគភាពបរិសុទ្ធនៃប្រូតេអ៊ីន (SDS-PAGE):ភាពបរិសុទ្ធនៃ Taq DNA polymerase គឺ≥95% កំណត់ដោយការវិភាគ SDS-PAGE ។
2.Endសកម្មភាព onuclease:អប្បបរមា 5 U នៃ Taq DNA polymerase ជាមួយ 1 μg λDNA សម្រាប់រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃ បណ្តាលឱ្យមិនមានការរិចរិលដែលអាចរកឃើញដូចដែលបានកំណត់។
3.សកម្មភាព Exonuclease:អប្បបរមា 5 U នៃ Taq DNA polymerase ដែលមាន 1 μg λ -Hind Ⅲ រំលាយ DNA អស់រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃ លទ្ធផលមិនបានរកឃើញការរិចរិលដូចដែលបានកំណត់ទេ។
4.សកម្មភាព Nickase:អប្បបរមា 5 U នៃ Taq DNA polymerase ដែលមាន 1 μg pBR322 DNA សម្រាប់រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C បណ្តាលឱ្យមិនមានការរិចរិលដែលអាចរកឃើញដូចដែលបានកំណត់។
5.សកម្មភាព RNase:អប្បបរមា 5 U នៃ Taq DNA polymerase ដែលមាន 1.6 μg MS2 RNA សម្រាប់រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C បណ្តាលឱ្យមិនមានការរិចរិលដែលអាចរកឃើញដូចដែលបានកំណត់។
6.E. coliDNA៖5 U នៃ Taq DNA polymerase ត្រូវបានពិនិត្យរកមើលវត្តមានរបស់ E. coli genomic DNA ដោយប្រើ TaqMan qPCR ជាមួយនឹង primers ជាក់លាក់សម្រាប់ទីតាំង E. coli 16S rRNA ។ការចម្លងរោគ DNA ហ្សែន E. coli គឺ ≤1 ចម្លង។
7.ការពង្រីក PCR (5.0 kb Lambda DNA)- ប្រតិកម្ម 50 µL ដែលមាន 5 ng Lambda DNA ជាមួយនឹង 5 ឯកតានៃ Taq DNA Polymerase សម្រាប់ 25 វដ្តនៃការពង្រីក PCR លទ្ធផលនៅក្នុងផលិតផល 5.0 kb ដែលរំពឹងទុក។
ការកំណត់ប្រតិកម្ម
| សមាសធាតុ | កម្រិតសំឡេង |
| គំរូ DNAa | ស្រេចចិត្ត |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| ថ្នាំ primer បញ្ច្រាស 10 μM | 1 μL |
| dNTP Mix (10mM នីមួយៗ) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μL |
| តាក DNA Polymeraseខ | 0.25 μL |
| ទឹកគ្មានជាតិគីមី | រហូតដល់ 50 μL |
កំណត់ចំណាំ៖
1) កំហាប់ប្រតិកម្មល្អបំផុតនៃគំរូផ្សេងៗគ្នាគឺខុសគ្នា។តារាងខាងក្រោមបង្ហាញពីការប្រើប្រាស់គំរូដែលបានណែនាំនៃប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម 50 µL ។
| ឌីអិនអេ | ចំនួនទឹកប្រាក់ |
| ហ្សែន | 1 ng-1 μg |
| Plasmid ឬ Viral | 1 pg-1 ng |
2) កំហាប់ល្អបំផុតនៃ Taq DNA Polymerase អាចមានចាប់ពី 0.25 µL ~ 1 µL នៅក្នុងកម្មវិធីឯកទេស។
ប្រតិកម្មកម្មវិធី
| ជំហាន | សីតុណ្ហភាព(°C) | ពេលវេលា | វដ្ត |
| ការប្រែពណ៌ដើមa | 95 ℃ | 5 នាទី | - |
| ការប្រែពណ៌ | 95 ℃ | ១៥-៣០ ស | 30-35 វដ្ត |
| ការស្រើបស្រាលខ | 60 ℃ | 15 ស | |
| ផ្នែកបន្ថែម | 72 ℃ | 1 គីឡូបៃ / នាទី | |
| ផ្នែកបន្ថែមចុងក្រោយ | 72 ℃ | 5 នាទី | - |
កំណត់ចំណាំ៖
1) លក្ខខណ្ឌ denaturation ដំបូងគឺសមរម្យសម្រាប់ប្រតិកម្ម amplification ភាគច្រើនហើយអាចត្រូវបានកែប្រែដោយយោងទៅតាមភាពស្មុគស្មាញនៃរចនាសម្ព័ន្ធគំរូ។ប្រសិនបើរចនាសម្ព័នគំរូមានភាពស្មុគ្រស្មាញ ពេលវេលានៃការប្រែពណ៌មុនអាចត្រូវបានពង្រីកដល់ 5 ទៅ 10 នាទី ដើម្បីកែលម្អប្រសិទ្ធភាពនៃការប្រែពណ៌ដំបូង។
2) សីតុណ្ហភាព annealing ត្រូវតែត្រូវបានលៃតម្រូវដោយយោងទៅតាមតម្លៃ Tm នៃ primer ដែលជាទូទៅត្រូវបានកំណត់ទៅ 3 ~ 5 ℃ទាបជាងតម្លៃ Tm នៃ primer;សម្រាប់គំរូស្មុគ្រស្មាញ វាចាំបាច់ក្នុងការលៃតម្រូវសីតុណ្ហភាព annealing និងពង្រីកពេលវេលាបន្ថែមដើម្បីសម្រេចបាននូវការពង្រីកប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព។
