រីណាស អេ
Ribonuclease A (RNaseA) គឺជា polypeptide ខ្សែតែមួយដែលមានចំណង disulfide ចំនួន 4 ដែលមានទម្ងន់ម៉ូលេគុលប្រហែល 13.7 kDa ។RNase A គឺជា endoribonuclease ដែលបង្ខូចទ្រង់ទ្រាយ RNA តែមួយខ្សែនៅសំណល់ C និង U ។ជាពិសេស ការបំបែកទទួលស្គាល់ចំណង phosphodiester ដែលបង្កើតឡើងដោយ 5′-ribose នៃ nucleotide និងក្រុម phosphate នៅលើ 3′-ribose នៃ pyrimidine nucleotide ដែលនៅជាប់គ្នា ដូច្នេះថា 2, 3′--cyclic phosphates ត្រូវបាន hydrolyzed ទៅ 3 ដែលត្រូវគ្នា។ ផូស្វ័រនុយក្លេអូស៊ីត (ឧទាហរណ៍ pG-pG-pC-pA-pG ត្រូវបានបំបែកដោយ RNase A ដើម្បីបង្កើត pG-pG-pCp និង A-PG) ។RNase A គឺសកម្មបំផុតក្នុងការបំបែក RNA តែមួយខ្សែ។កំហាប់ការងារដែលបានណែនាំគឺ 1-100μG/mL ដែលអាចប្រើបានជាមួយប្រព័ន្ធប្រតិកម្មផ្សេងៗ។កំហាប់អំបិលទាប (0-100 mM NaCl) អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីកាត់ខ្សែ RNA តែមួយខ្សែ RNA ពីរខ្សែ និងខ្សែសង្វាក់ RNA ដែលបង្កើតឡើងដោយការបង្កាត់ RNA-DNA ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ នៅកំហាប់អំបិលខ្ពស់ (≥0.3 M) RNase A ពិសេសកាត់ផ្តាច់ RNA តែមួយខ្សែប៉ុណ្ណោះ។
RNase A ត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅបំផុតដើម្បីយក RNA ចេញកំឡុងពេលរៀបចំ plasmid DNA ឬ DNA ហ្សែន។ ថាតើ DNase សកម្មឬអត់ក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការរៀបចំអាចប៉ះពាល់ដល់ប្រតិកម្មយ៉ាងងាយស្រួល។វិធីសាស្រ្តប្រពៃណីនៃការដាំឱ្យពុះក្នុងទឹកងូតទឹកអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីអសកម្មសកម្មភាព DNase ។ផលិតផលនេះមិនមានផ្ទុក DNase និង protease ហើយមិនត្រូវការការព្យាបាលកំដៅមុនពេលប្រើ។លើសពីនេះ ផលិតផលនេះក៏អាចត្រូវបានប្រើនៅក្នុងការពិសោធន៍ជីវវិទ្យាម៉ូលេគុល ដូចជាការវិភាគការការពារ RNase និងការវិភាគលំដាប់ RNA ផងដែរ។
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក
ផលិតផលអាចត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -25 ~ 15 ℃, មានសុពលភាព 2 ឆ្នាំ។
សេចក្តីណែនាំ
នេះគឺជាវិធីសាស្រ្តទូទៅមួយសម្រាប់ការរៀបចំដំណោះស្រាយការផ្ទុក RNase A ។វាក៏អាចត្រូវបានរៀបចំដោយវិធីសាស្រ្តផ្សេងទៀតយោងទៅតាមវិធីសាស្រ្តប្រពៃណីនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ ឬអក្សរសិល្ប៍យោង (ដូចជារំលាយដោយផ្ទាល់ក្នុង 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 ឬដំណោះស្រាយ Tris-NaCl)
1. ប្រើ 10 mM sodium acetate (pH 5.2) ដើម្បីរៀបចំ 10 mg/mL នៃដំណោះស្រាយផ្ទុក RNase A
2. កំដៅនៅ 100 ℃ សម្រាប់ 15 នាទី។
3. ត្រជាក់ដល់សីតុណ្ហភាពបន្ទប់ បន្ថែមបរិមាណ 1/10 នៃ 1 M Tris-HCl (pH 7.4) លៃតម្រូវ pH របស់វាទៅ 7.4 (សម្រាប់ឧទាហរណ៍ បន្ថែម 500 មីលីលីត្រនៃ 10g/ml ដំណោះស្រាយផ្ទុក RNase 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. កញ្ចប់រងនៅ -20 ℃សម្រាប់ការផ្ទុកកកដែលអាចមានស្ថេរភាពរហូតដល់ 2 ឆ្នាំ។
[កំណត់សម្គាល់]៖ នៅពេលពុះសូលុយស្យុង RNaseA ក្រោមលក្ខខណ្ឌអព្យាក្រឹត ទឹកភ្លៀង RNase នឹងបង្កើត។ដាំឱ្យពុះនៅកម្រិត pH ទាប ហើយប្រសិនបើមានទឹកភ្លៀង វាអាចត្រូវបានគេសង្កេតឃើញ ដែលអាចបណ្តាលមកពីវត្តមានរបស់ប្រូតេអ៊ីនមិនបរិសុទ្ធ។ប្រសិនបើដីល្បាប់ត្រូវបានរកឃើញបន្ទាប់ពីឆ្អិន ភាពមិនស្អាតអាចត្រូវបានយកចេញដោយ centrifugation ល្បឿនលឿន (13000rpm) ហើយបន្ទាប់មកដាក់កញ្ចប់រងសម្រាប់ការផ្ទុកត្រជាក់។
ព័ត៌មានអំពីផលិតផល
| សទិសន័យ | Ribonuclease I;លំពែង ribonuclease;Ribonuclease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;រីណាស A;ជំងឺ Endoribonulcease I |
| លេខ CAS | 9001-99-4 |
| រូបរាង | ម្សៅ lyophilized ពណ៌ស |
| ទម្ងន់ម៉ូលេគុល | ~ 13.7kDa (លំដាប់អាស៊ីតអាមីណូ) |
| តម្លៃ Ph | 7.6 (ជួរសកម្មភាព 6-10) |
| សីតុណ្ហភាពសមស្រប | 60 ℃ (ជួរសកម្មភាព 15-70 ℃) |
| ភ្នាក់ងារធ្វើឱ្យសកម្ម | Na2+.ខេ+ |
| អ្នករារាំង | ថ្នាំទប់ស្កាត់ Rnase |
| វិធីសាស្រ្តអសកម្ម | មិនអាចដំណើរការដោយកំដៅបានទេ វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើជួរឈរ centrifuge |
| ប្រភពដើម | បូវីន |
| ភាពរលាយ | រលាយក្នុងទឹក (10mg/ml) |
| ការបាត់បង់ស្ងួត | ≤5.0% |
| សកម្មភាពអង់ស៊ីម | ≥60 Kunitz ឯកតា/mg |
| ចំណុចអ៊ីសូអេឡិចត្រិច | ៩.៦ |
កំណត់ចំណាំ
ដើម្បីសុវត្ថិភាព និងសុខភាពរបស់អ្នក សូមពាក់អាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ និងស្រោមដៃដែលអាចចោលបានសម្រាប់ប្រតិបត្តិការ។
